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ÖØÇì´óѧ·Ö×ÓÉúÎïѧöλÔÓéÀÖ¹Ù·½appÏÂÔØÌâ¿â+´ð°¸

±¾Õ¾Ð¡±à Ãâ·ÑöλÔÓéÀÖ¹Ù·½appÏÂÔØÍø/2018-02-28

2010Äê ¸ßµÈ·Ö×ÓÉúÎïѧ

µÚ1Ò³£¬¹²8Ò³ ¸ß¼¶·Ö×ÓÉúÎïѧ

1. ÊÔÊöÀûÓûùÒò¹¤³ÌµÄ¼¼Êõµ÷¿Ø»ùÒò±í´ïµÄÖ÷Òª·½·¨

ԭλÔÓ½»¼¼Êõ

ԭλÔÓ½»(In Situ Hybridization,ISH) ÊÇÓñê¼ÇµÄºËËá̽Õ룬¾­·ÅÉä×ÔÏÔÓ°»ò·Ç·ÅÉä¼ì²âÌåϵ£¬ÔÚ×éÖ¯¡¢Ï¸°û¡¢¼äÆÚºË¼°È¾É«ÌåÉ϶ԺËËá½øÐж¨Î»ºÍÏà¶Ô¶¨Á¿Ñо¿µÄÒ»ÖÖÊֶΡ£Í¨³£¿ÉÒÔ·ÖΪÁ½´óÀࣺ

1¡¢RNA ԭλÔÓ½»£ºÓ÷ÅÉäÐÔ»ò·Ç·ÅÉäÐÔ(ÈçµØ¸ßÐÁ¡¢ÉúÎïËØµÈ) ±ê¼ÇµÄÌØÒìÐÔ̽ÕëÓë±»¹Ì¶¨µÄ×éÖ¯ÇÐÆ¬·´Ó¦£¬Èôϸ°ûÖдæÔÚÓë̽Õ뻥²¹µÄmRNA ·Ö×Ó£¬Á½ÕßÔÓ½»²úÉúË«Á´RNA £¬¾Í¿ÉÒÔͨ¹ý¼ì²â·ÅÉäÐÔ±ê¼Ç»ò¾­Ã¸´ÙÃâÒßÏÔÉ«£¬¶Ô¸Ã»ùÒòµÄ±í´ï²úÎïÔÚϸ°ûˮƽÉÏ×÷³ö¶¨ÐÔ¶¨Á¿·ÖÎö£»

2¡¢Ó«¹âԭλÔÓ½»(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)£ºÊ×ÏȶÔÓڹѺËÜÕËá̽Õë×öÌØÊâÐÞÊκͱê¼Ç£¬È»ºóÓÃԭλÔÓ½»·¨Óë°ÐȾɫÌå»òDNA ÉÏÌØ¶¨µÄÐòÁнáºÏ£¬ÔÙͨ¹ýÓëÓ«¹âËØ·Ö×ÓÏàżÁªµÄµ¥¿Ë¡¿¹ÌåÀ´È·¶¨¸ÃDNA ÐòÁÐÔÚȾɫÌåµÄλÖá£

¶¨µãÍ»±ä¼¼Êõ

¶¨µãÍ»±äÊÇÖØ×éDNA ½ø»¯µÄ»ù´¡£¬¸Ã·½·¨Í¨¹ý¸Ä±ä»ùÒòÌØ¶¨Î»µãºËÜÕËáÐòÁÐÀ´¸Ä±äËù±àÂëµÄ°±»ùËáÐòÁУ¬³£ÓÃÓÚÑо¿Ä³¸ö°±»ùËá²Ð»ù¶Ôµ°°×ÖʵĽṹ¡¢´ß»¯»îÐÔÒÔ¼°½áºÏÅäÌåÄÜÁ¦µÄÓ°Ï죬Ҳ¿ÉÓÃÓÚ¸ÄÔìDNA µ÷¿ØÔª¼þÌØÕ÷ÐòÁС¢ÐÞÊαí´ïÔØÌå¡¢ÒýÈëÐµÄøÇÐλµãµÈ¡£

RNAi ¼¼Êõ

RNA ¸ÉÈÅ(RNA interference,RNAi)¼¼ÊõÀûÓÃË«Á´Ð¡RNA ¸ßЧ¡¢ÌØÒìÐÔ½µ½âϸ°ûÄÚͬԴmRNA £¬´Ó¶ø×è¶ÏÌåÄڰлùÒò±í´ï£¬Ê¹Ï¸°û³öÏְлùÒòȱʧµÄ±íÐÍ¡£Æä¹ý³ÌÒ»°ãΪ£º

1¡¢ÔÚDicer µÄ²ÎÓëÏ£¬Ï¸°ûÖеÄË«Á´RNA Ê×Ïȱ»½µ½âÐγÉ21-25¸öºËÜÕËáµÄСƬ¶ÎË«Á´RNA(siRNA)£»

2¡¢siRNA Öеķ´ÒåÁ´Ö¸µ¼ºÏ³ÉÒ»ÖÖ±»³ÆÎªRNA ÓÕµ¼µÄ³ÁĬ¸´ºÏÌå(RISC)µÄºËµ°°×Ì壻

3¡¢RISC Ôٽ鵼ÇиîÄ¿µÄmRNA ·Ö×ÓÖÐÓësiRNA ·´ÒåÁ´»¥²¹µÄÇøÓò£¬´Ó¶øÊµÏÖ¸ÉÈÅ»ùÒò±í´ïµÄ¹¦ÄÜ¡£

2. ÂÛÊöÔ­ºËÉúÎïºÍÕæºËÉúÎï»ùÒò±í´ïµ÷¿ØµÄÒìͬ

´ð£º1¡¢ÕæºËÉúÎï»ùÒò×é´ó, ȾɫÌåÊýÁ¿¶à, Çҽṹ¸´ÔÓ, ´æÔÚ»ùÒò¼Ò×åºÍ¶ÏÁÑ»ùÒò£»Ô­ºËÉúÎï»ùÒò×éС, ȾɫÌåÊýÁ¿ÉÙ, ½á¹¹¼òµ¥, ÓÐÖØµþ»ùÒòºÍ²Ù×Ý×ӽṹ£¬»ùÒò±í´ïµ÷¿Ø¿ÉÒÔÔÚ¸´ÖÆ¡¢À©Ôö¡¢»ùÒò¼¤»î¡¢×ªÂ¼¡¢×ªÂ¼ºó¡¢·­ÒëºÍ·­ÒëºóµÈ¶à¼¶Ë®Æ½ÉϽøÐÐ, µ«×ªÂ¼Ë®Æ½µ÷¿ØÊÇÖ÷ÒªµÄ¡£ÕæºËÉúÎï»ùÒò±í´ïµ÷¿Ø»úÖÆ·¢ÉúÔÚȾɫÌå»î»¯¡¢»ùÒòת¼¼¤»î¡¢×ªÂ¼ºó¼Ó¹¤¡¢·­Òë¼°·­Òëºó¼Ó¹¤µÈ¶àˮƽµÄµ÷½Ú£¬Ê¼þÒ²¸´ÔӵĶà¡£

2¡¢ÕæºËÉúÎï»ùÒò±í´ïÒÔÕýµ÷¿ØÎªÖ÷£¬»ùÒòµÄת¼ÓëȾɫÖʵĽṹ±ä»¯Ïà¹Ø, ÕæºË»ùÒòת¼·¢ÉúÔÚϸ°ûºË(ÏßÁ£Ìå»ùÒòµÄת¼ÔÚÏßÁ£ÌåÄÚ), Ðè¶ÔÄÚº¬×Ó¾«È·¼ô½Ó¼Ó¹¤£¬·­ÒëÔò¶àÔÚ°û½¬, Á½¸ö¹ý³ÌÊÇ·Ö¿ªµÄ¡£»ùÒò±í´ïµ÷¿ØµÄ»·½Ú±ÈÔ­ºËÉúÎï¸ü¶à¡£Ô­ºËÉúÎïÖÐ, ÓªÑøÌõ¼þºÍ»·¾³ÒòËØ¶Ô»ùÒò±í´ïµ÷¿ØÆð¾Ù×ãÇáÖØµÄ×÷Óã¬mRNA ÔÚÐγɹý³ÌÖÐÓëºËÌÇÌå»ìºÏÔÚÒ»Æð£¬¼´×ªÂ¼ºÍ·­Òë¹ý³ÌÏàñîÁª¡£

3. ¼òÊöụ²¹É¸Ñ¡£¨À¶°×°ßɸÑ¡£©

ÊÊÓÃÓÚº¬ÓаëÈéÌÇÜÕø»ùÒò£¨LacZ £©µÄÔØÌ壬Èç pUCϵÁеÈ£¬ÆäÔ­ÀíÊÇ£ºÔØÌ庬ÓÐLacZ µÄµ÷¿ØÐòÁкÍN ¶Ë146¸ö°±»ùËáµÄ±àÂëÐÅÏ¢¡£ÔÚÕâ¸ö±àÂëÇøÖвåÈëÁËÒ»¸ö¶à¿Ë¡λµã¡£µ±ÕâÖÖÔØÌå½øÈë¿É±àÂëβ-°ëÈéÌÇÜÕøC ¶Ë²¿·ÖÐòÁеÄËÞÖ÷ϸ°ûºó£¨ÖÊÁ£ºÍËÞÖ÷ϸ°û±àÂëµÄƬ¶Î¸÷×Ô¶¼Ã»ÓÐø»îÐÔ£©£¬ËüÃÇ¿ÉÒÔÈÚΪһÌ壬ÐγɾßÓÐøѧ»îÐԵĵ°°×ÖÊ£¬ÕâÖÖÏÖÏó½Ðụ²¹¡£ÓÉụ²¹¶ø²úÉúµÄ Lac+ ϸ¾úÔÚ³ÊÉ«µ×Îï X-gal

ºÍÓÕµ¼¼ÁIPTG ´æÔÚÏÂÐγÉÀ¶É«¾úÂä¡£µ±ÍâÔ´DNA ²åÈëµ½ÖÊÁ£µÄ¶à¿Ë¡λµãºó£¬µ¼Ö²úÉúÎÞụ²¹ÄÜÁ¦µÄ°±»ù¶ËƬ¶Î¡£Òò´Ë£¬´øÓÐÖØ×éÖÊÁ£µÄϸ¾úÐγɰ×É«¾úÂ䡣ͨ¹ý³ÊÉ«·´Ó¦¼´¿É³õ²½Ê¶±ð¿ÉÄÜ´øÓÐÖØ×éÖÊÁ£µÄ¾úÂ䡣ͨ¹ýСÁ¿ÖƱ¸ÖÊÁ£DNA ½øÐÐÏÞÖÆÃ¸ÇзÖÎö£¬¼´¿ÉÈ·¶¨ÕâЩÖÊÁ£µÄ½á¹¹¡£

4. ¼òÊö¾úÂäPCR ɸѡ

¸Ã·½·¨ÊÇÒÔת»¯¾úµ¥¸ö¿Ë¡Ϊģ°å£¬²ÉÓÃÌØÒìÐÔÒýÎï»òͨÓÃÒýÎï¶ÔÄ¿µÄ»ùÒò½øÐÐPCR À©Ôö£¬È»ºóͨ¹ýÄý½ºµçÓ¾µÈÊÖ¶ÎÀ´¼ø¶¨É¸Ñ¡ÑôÐÔת»¯×Ó£¬×îºó¿ÉÒÔ¾­ÌáÈ¡ÖÊÁ£DNA ½øÐÐøÇкÍÖÊÁ£PCR Ë«ÖØ¼ø¶¨ÒÔ¼°²âÐò·ÖÎö½øÒ»²½È·ÈϾúÂäPCR µÄ½á¹û¡£

5. ¼òÊöÔÓ½»Ì½Õë¼¼ÊõµÄÔ­ÀíºÍ·½·¨

ÔÚÖÆ±¸ºÃºÏÊʵĻùÒòÎÄ¿âºó£¬Èç¹ûÓÿɻñµÃÄ¿µÄ»ùÒòµÄ»¥²¹DNA »òRNA ×ö̽Õ룬¾Í¿ÉÒÔÀûÓúËËáÔÓ½»¼¼Êõ¼ø¶¨³öÌØ¶¨µÄÖØ×éÌå¿Ë¡¡£

Ô­Àí£ºÈÎÁ½Ìõµ¥Á´ºËËá·Ö×Ó¶¼ÓÐÏ໥Ðγɼî»ù¶ÔµÄÇ÷ÊÆ£¬µ«ÐγɵĴó¶àÊý·Ö×Ó¶ÔÓÉÓÚÖ»ÓÐÉÙÊýÁ´¼äÇâ¼üÐγÉ£¬ÔÓ½»½á¹¹²¢²»Îȶ¨£¬Èç¹û¶à¾ÛºËÜÕËáÁ´ÊÇ»¥²¹µÄ£¬¼î»ù¶ÔµÄ´óÁ¿ÐγÉʹ˫Á´·Ö×ÓÎȶ¨¡£

²½Ö裺1¡¢°Ñ¾úÂä»òÊɾú°ß×ªÒÆµ½ÏõËáÏËάĤÉÏ£¬´¦Àí³ýÈ¥ÔÓÖÊ£¬Ö»ÁôÏÂDNA £¬Ê¹DNA ·Ö×Ó±äÐÔ£¬Ë«ÂÝÐýÖ®¼äµÄÇâ¼ü¶ÏÁÑ

2¡¢¶Ìʱ¼äµÄ¼ÓÈÈ»áʹÕâЩµ¥Á´DNA ·Ö×ÓÀι̽áºÏµ½Ä¤ÉÏ¡£DNA ·Ö×ÓÓëĤ½áºÏÆä¼î»ùÊÇ×Ô

ÓɵÄ£¬¿ÉÒÔ×ÔÓÉÅä¶Ô¡£

3¡¢È»ºó°Ñ̽Õë¼ÓÉϱêÇ©£¬¼ÓÈȱäÐÔ£¬ÔÙ¼Óµ½ÊÊÒ˺ËËáÍË»ðµÄ»¯Ñ§ÈÜÒºÖÐÓëĤ½áºÏ¡£¾­¹ýÒ»

¶Îʱ¼ä£¬µÈÔÓ½»·¢Éúºó£¬Ï´È¥Ã»ÓнáºÏµÄ̽Õ룬¸ÉÔ¼ì²â½áºÏµÄ̽ÕëµÄλÖ㬴ӶøÉ¸Ñ¡³öÏëÒª»ñµÃÑôÐÔ¿Ë¡¡£

6. ¶ÔÌìÈ»ÖÊÁ£µÄÈ˹¤¹¹½¨¡¢¸ÄÔìͨ³£ÐèÒª¶ÔÖÊÁ£ÄÄЩ·½Ãæ½øÐвÙ×÷¡¢¸Ä½ø?

´ð£º¶ÔÓÚÌìÈ»ÖÊÁ£Ó¦¸Ã×öÒÔϼ¸·½ÃæµÄ²Ù×÷¡¢¸Ä½ø£º

1. ɾ³ýһЩ·Ç±ØÒªµÄÇø¶Î¼°¶ÔËÞÖ÷Óв»Á¼Ó°ÏìµÄÇø¶Î

2. Ï÷¼õÔØÌåµÄ·Ö×ÓÁ¿£¬ÊÇÔØÌå¾ßÓиü´óµÄÈÝÄÉÍâԴƬ¶ÎµÄÄÜÁ¦

3. ¼ÓÉÏÒ×ÓÚÑ¡Ôñ»ò¼ì²âµÄ±ê¼Ç£¬ÒÔ±ãɸѡ³öÑôÐÔ¿Ë¡

4. ÏÞÖÆÐÔÄÚÇÐøµÄøÇÐλµãµÄ¸ÄÔ죬±ãÓÚÍâÔ´»ùÒò²åÈëµ½ÔØÌåµÄÌØ¶¨Î»ÖÃ

5. ¼ÓÉÏһЩµ÷¿ØÔª¼þ£¬ÓÐÀûÓÚ»ùÒòµÄ±í´ï

6. °²È«ÐÔ¸ÄÔ죨ÒòΪÊǼò´ðÌ⣬ÒÔÏÂËĵã¿ÉÒÔ²»Òª£¬µ«½¨Òé×îºÃÒª£©:

£¨1£©·Ç´«µÝÐԺͲ»±»´ø¶¯×ªÒÆ¡£ÔÚ»ùÒò¹¤³Ì²Ù×÷ÖУ¬²»Ï£ÍûÔØÌåÄܹ»½øÐÐ×ÔÖ÷´«µÝ£¬Ò²²»Ï£Íû±»´ø¶¯×ªÒÆ£»

£¨2£©¾ßÓÐÌõ¼þÖÂËÀÍ»±ä¡£ÈçζÈÃô¸Ðʱ¾Íɥʧ¸´ÖÆÄÜÁ¦£¬¿É·ÀÖ¹¿Ë¡»ùÒòÀ©É¢£¬Ö»´æÔÚÓÚÏÞ¶¨µÄËÞÖ÷ϸ°ûÖУ»

£¨3£©Ò»°ãÇé¿öϲ»Ï£ÍûÓëËÞÖ÷ȾɫÌå·¢ÉúÖØ×飬ÒòÎªÖØ×éºó¿ÉÄܸøËÞÖ÷´øÀ´Í»±ä£»

£¨4£©ÓнÏСµÄËÞÖ÷·¶Î§¡£

7. ´ó³¦¸Ë¾úÈéÌDzÙ×Ý×ÓµÄÖ÷Òª½á¹¹£¬µ÷½Ú»úÖÆ¡£

´ð£º´ó³¦¸Ë¾úµÄÈéÌDzÙ×Ý×Ó£¨LAC ²Ù×Ý×Ó£©º¬Z ¡¢Y ¼°A Èý¸ö½á¹¹»ùÒò£¬·Ö±ð±àÂëβ—°ëÈéÌÇÜÕø¡¢Í¸Ã¸¡¢ÒÒõ£»ù×ªÒÆÃ¸£¬´ËÍ⻹ÓÐÒ»¸ö²Ù×Ý»ùÒòO ¡¢Ò»¸öÆô¶¯×ÓP ¼°Ò»¸öµ÷½Ú»ùÒòI ¡£I »ùÒò±àÂëÒ»ÖÖÓëO

»ùÒò½áºÏµÄ×è¶ôµ°°×£¬Ê¹²Ù×Ý×ÓÊÜ×è¶ô¶ø´¦ÓÚת¼ʧ»î״̬¡£ÔÚP ÉÏÓλ¹ÓÐÒ»¸ö·Ö½â£¨´úл£©Îï»ùÒò¼¤»îµ°°×CAP ½áºÏλµã¡£ÓÉP ÐòÁС¢O ÐòÁкÍCAP ½áºÏλµã¹²Í¬¹¹³ÉLAC ²Ù×Ý×ӵĵ÷¿ØÇø£¬Èý¸öøµÄ±àÂë»ùÒòÓÉͬһµ÷¿ØÇøµ÷½Ú£¬ÊµÏÖ»ùÒò²úÎïµÄЭµ÷±í´ï¡£

µ÷½Ú»úÖÆ£º·Ö×è¶ôµ°°×µÄ¸ºµ÷¿ØÓëCAP µÄÕýµ÷¿ØÁ½ÖÖ»úÖÆ£¬»¥ÏàЭµ÷¡¢»¥ÏàÖÆÔ¼¡£

1¡¢×è¶ôµ°°×µÄ¸ºµ÷½Ú£ºÔÚûÓÐÈéÌÇ´æÔÚʱ£¬I »ùÒò±í´ïµÄÈéÌÇ×è¶ôµ°°×ÓëO ÐòÁнáºÏ£¬×è¶Ïת¼Æô¶¯£»µ±ÓÐÈéÌÇ´æÔÚʱ£¬¾­Í¸Ã¸´ß»¯¡¢×ªÔ˽øÈëϸ°û£¬ÔÙ¾­Ô­ÏÈ´æÔÚÓÚϸ°ûÖеÄÉÙÊýβ-°ëÈéÌÇÜÕø´ß»¯£¬×ª±äΪ±ðÈéÌÇ£¬Óë×è¶ôµ°°×½áºÏ£¬µ¼ÖÂ×è¶ôµ°°×ÓëO ÐòÁнâÀë¡¢·¢Éúת¼£¬Ê¹β-°ëÈéÌÇÜÕø·Ö×Ó¼±¾çÔö¼Ó¡£

2¡¢CAP µÄÕýµ÷½Ú£ºµ±Ã»ÓÐÆÏÌÑÌǼ°cAMP Ũ¶È½Ï¸ßʱ£¬cAMP ÓëCAP ½áºÏ£¬ÕâʱCAP ½áºÏÔÚÈéÌÇÆô¶¯ÐòÁи½½üµÄCAP λµã£¬¿É´Ì¼¤RNA ת¼»îÐÔ£»µ±ÆÏÌÑÌÇ´æÔÚʱ£¬cAMP Ũ¶È½µµÍ£¬cAMP ÓëCAP ½áºÏÊÜ×裬Òò´ËÈéÌDzÙ×Ý×Ó±í´ïϽµ¡£

8. ÊÔ˵Ã÷ÕæºËϸ°ûÓëÔ­ºËϸ°ûÔÚ»ùÒòת¼£¬·­Òë¼°DNA µÄ¿Õ¼ä½á¹¹·½Ãæ´æÔÚµÄÖ÷Òª²îÒ죬±íÏÖÔÚÄÄЩ·½Ã棿

±È½ÏÔ­ºË¡¢ÕæºË»ùÒò×éÒìͬ

£¨1£©È¾É«Ìå·½Ãæ£ºÔ­ºËÉúÎïΪ»·×´DNA ·Ö×Ó£¬ÇÒDNA Âã¶»ò½áºÏÉÙÁ¿µ°°×ÖÊ£¬Ö»ÓÐÒ»¸ö»ùÒòÁ¬ËøÈº£»ÕæºËÉúÎïΪÏßÐÔË«Á´DNA ·Ö×Ó£¬ÇÒDNA ͬ×éµ°°×ºÍ·Ç×éµ°°×½áºÏ£¬ÓÐ2¸öÒÔÉÏ»ùÒòÁ¬ËøÈº¡£

£¨2£©È¾É«ÌåÒÅ´«ÎïÖÊ£ºÔ­ºËÉúÎïΪÖÊÁ££¬ÕæºËÉúÎïΪϸ°ûÆ÷»ùÒò×é¡£

£¨3£©×ªÂ¼µ¥Ôª£ºÔ­ºËÉúÎïΪ¶à˳·´×Ó£¬ÕæºËÉúÎïΪµ¥Ë³·´×Ó£¬»ùÒò¼Ò×å¡£

£¨4£©DNA ÐòÁУºÔ­ºËÉúÎïÎÞ»òºÜÉÙÓÐÖØ¸´ÐòÁУ¬ÕæºËÉúÎïÓÐÖØ¸´ÐòÁС£

£¨5£©»ùÒò±í´ï£ºÔ­ºËÉúÎïRNA ºÍµ°°×ÖÊÔÚÍ¬Ò»Çø¼äºÏ³É£¬ÓÐÖØµþ»ùÒò£»ÕæºËÉúÎïRNA ÔÚºËÖкϳɺͼӹ¤£¬µ°°×ÖÊÔÚϸ°ûÖкϳÉ£¬ÓжÏÁÑ»ùÒò¡£

±È½ÏÔ­ºË¡¢ÕæºËÉúÎïµÄת¼¹ý³ÌÒìͬ

´ð£ºÔ­ºËÉúÎ

¢Ù Æðʼ¹ý³ÌÐèRNA ¾ÛºÏøºËÐÄø£¬ÓÉσÑÇ»ù±æÈÏÆðʼµã£¨-35bp Çø£©¡£ÔÚÕâÒ»Çø¶ÎøÓëÄ£°åµÄ½áºÏËɳÚ£¬

Ã¸ÒÆÏò-10Çø²¢¿çÈëת¼Æðʼµã¡£

¢ÚÑÓ³¤¹ý³ÌµÄºËÜÕËá¾ÛºÏ½öÐèºËÐÄø´ß»¯¡£

¢ÛÖÕÖ¹·ÖÒÀÀµρÒò×ӵĺͲ»ÒÀÀµρÒò×ÓµÄת¼ÖÕÖ¹¡£

ÕæºËÉúÎ

¢Ùת¼ÆðʼǰµÄ-25bp Çø¶ÎÓÐÆô¶¯×ӵĺËÐÄÐòÁÐTATAbox ¡£´ËÍâDNA ·Ö×ÓÉÏ»¹¾ßÓÐÆäËû¿ÉÓ°Ïìת¼µÄ˳ʽ×÷ÓÃÔª¼þ£¬ÒÔ¼°ÄܱæÈϺͽáºÏת¼ÉÏÓÎÇø¶ÎµÄ·´Ê½×÷ÓÃÒò×Ó¡£ÕæºËÉúÎïRNA ¾ÛºÏø²»ÓëDNA ·Ö×ÓÖ±½Ó½áºÏ£¬¶øÐèÒÀ¿¿ÖÚ¶àµÄת¼Òò×Ó¡£

¢ÚÕæºËÉúÎïµÄת¼ÑÓ³¤¹ý³ÌÓëÔ­ºËÉúÎï´óÖÂÏàËÆ¡£

¢ÛÕæºËÉúÎïmRNA ÓÐpolyA β½á¹¹£¬ÊÇת¼ºó²Å¼Ó½øÈ¥µÄ¡£×ªÂ¼²»ÊÇÔÚpolyA λÖÃÉÏÖÕÖ¹£¬¶øÊdz¬¹ýÊý°ÙÉõÖÁÉÏǧºËÜÕËáºó²ÅÍ£¶Ù¡£

±È½ÏÔ­ºË¡¢ÕæºËÉúÎïµÄ·­ÒëÒìͬ

1¡¢Ô­ºËÉúÎïÓëÕæºËÉúÎïºËµ°°×ÌåµÄ×é³É²»Í¬¡£

2¡¢ÕæºËÉúÎïëÄÁ´ºÏ³ÉÆðʼ¹ý³ÌÓëÔ­ºËÉúÎïÏàËÆµ«¸ü¸´ÔÓ¡£ÕæºËÉúÎïÓв»Í¬µÄ·­ÒëÆðʼ³É·Ö£¬ÆðʼÒò×Ó

ÖÖÀà¸ü¶à£¬Æðʼ¼×Áò°±Ëá²»Ðè¼×»ù»¯µÈ¡£³ÉÊìµÄÕæºËmRNA ÓÐ5' ñ×ÓºÍ3'polyA β½á¹¹¡£

3¡¢ÕæºËÉúÎïëÄÁ´ºÏ³ÉµÄÑÓ³¤¹ý³ÌÓëÔ­ºËÉúÎï»ù±¾ÏàËÆ£¬Ö»ÊÇÓв»Í¬µÄ·´Ó¦ÌåϵºÍÑÓ³¤Òò×Ó¡£

4¡¢ÕæºËÉúÎïµÄ·­ÒëÖÕÖ¹¹ý³ÌÓëÔ­ºËÉúÎïÏàËÆ¡£

9. ÊÔ˵Ã÷É«°±Ëá²Ù×Ý×Ó£¨Trp operon)ÔÚÔ­ºË»ùÒò±í´ïµ÷¿ØÖеĵ÷¿Ø»úÖÆºÍÖØÒª×÷Óá£

É«°±Ëá²Ù×Ý×ӽṹϵ£º£¨1£©º¬ÓÐ5Öֽṹ»ùÒò£ºTrpE, D, C, B, A£»

£¨2£©ËüµÄµ÷¿Ø½á¹¹£ºÆô¶¯×Ó£¬²Ù×Ý×Ó£¬Ç°µ¼ÐòÁУ¬Èõ»¯×Ó¡£

£¨3£©×è¶ôÎïTrp »ùÒò£ºËüÓëTrp ²Ù×Ý×ÓÏà¾à½ÏÔ¶¡£

´óÁ¿Trp ´æÔÚʱ£¬´ó³¦¸Ë¾úµÄ5ÖÖøµÄת¼ͬʱÊܵ½ÒÖÖÆ£¬Trp ²»×ãʱ£¬Õâ5ø»ùÒò¿ªÊ¼×ªÂ¼¡£Ç°µ¼ÐòÁÐÖк¬ÓÐË¥¼õ×ÓÇøÓò£¬ÔÚǰµ¼ÐòÁÐÖеÚ10λºÍµÚ11λÓÐÏàÁÚÁ½¸öÉ«°±ËáÃÜÂë×Ó£¬²ÎÓëת¼Èõ»¯»úÖÆ£¬Èõ»¯×Ó¶ÔRNA ¾ÛºÏøµÄÓ°ÏìÒÀÀµÓÚǰµ¼ëÄ·­ÒëÖкËÌÇÌåËù´¦µÄλÖãº

£¨1£©µ±Trp Ũ¶È¸ßʱ£¬¿ÉÍêÕû·­Òë³É¶ÌëÄ£¬ºËÌÇÌå¿É˳Àûͨ¹ýÁ½¸öÏàÁÚµÄÉ«°±ËáÃÜÂë×Ó£¬ÔÚ4Çø±»×ªÂ¼Ç°£¬ºËÌÇÌå¾Íµ½´ï2Çø£¬ÕâÑùʹ2-3Çø²»ÄÜÅä¶Ô£¬3-4Çø¿É×ÔÓÉÅä¶ÔÐγɾ¥-»·×´ÖÕÖ¹×ӽṹ£¬×ªÂ¼Í£Ö¹¡£Trp ²Ù×Ý×ÓÖеĽṹ»ùÒò±»¹Ø±Õ¶ø²»ÔٺϳÉÉ«°±Ëá¡£

£¨2£© µ±Trp Ũ¶ÈµÍʱ£¬¸ºÔØÓÐTrp µÄתÔËRNA Ò²ÉÙ£¬ÕâÑù·­Òëͨ¹ýÁ½¸öÏàÁÚÉ«°±ËáÃÜÂë×ÓµÄËٶȾͻáºÜÂý£¬µ±4Çø±»×ªÂ¼Íê³Éʱ£¬ºËÌÇÌå²Åµ½´ï1Çø£¬ÕâʱµÄǰµ¼Çø½á¹¹ÊÇ2-3ÇøÅä¶Ô£¬²»ÐγÉ3-4ÇøÅä¶ÔµÄÖÕÖ¹½á¹¹£¬¹Êת¼¿É¼ÌÐø½øÐУ¬Ö±µ½½«Trp ²Ù×Ý×ӵĽṹ»ùÒòÈ«²¿×ªÂ¼¡£

11. ²ûÊö½Íĸת¼¼¤»îÒò×ÓGAL4µÄµ÷¿Ø·½Ê½¼°ÆäÔÚ½Íĸ˫ÔÓºÏϵͳ(yeast two hybrid system) ÖеÄÓ¦Óá£

´ð£ºGAL4ÓÉÁ½¸ö½á¹¹Óò×é³É£¬Ò»¸öÊÇDNA ½áºÏÓòBD £¬Ò»¸öÊÇת¼¼¤»îÓòAD £¬ÕâÁ½¸ö½á¹¹Óò¸÷¾ß¹¦ÄÜ£¬»¥²»Ó°Ïì¡£µ«¾ßÓÐÍêÕû¼¤»î¹¦ÄܵÄGAL4±ØÐëͬʱº¬ÓÐÕâÁ½¸ö½á¹¹Óò¡£µ±AD ÓëBD ½áºÏºó£¬ÐγɵÄÍêÕûת¼Òò×Ó¿ÉÒÔ¼¤»î±»BD ½áºÏµÄ»ùÒòµÄ±í´ï¡£

½«±àÂë´ý²âµ°°×X µÄDNA ÐòÁÐͬ±àÂëGAL4 BDµÄDNA ÐòÁÐÕûºÏÔÚÒ»¸öÔØÌåÉÏ£¬±í´ï²úÉúX-GAL4ÔӺϵ°°×£»½«±àÂëµ°°×ÖÊY µÄDNA ÐòÁÐͬ±àÂëGAL4 ADµÄDNA ÐòÁÐÕûºÏÔÚÒ»¸öÔØÌåÉÏ£¬±í´ï²úÉúY-GAL4ÔӺϵ°°×¡£ÕâÁ½ÖÖÔӺϵ°°×¶¼Óк˶¨Î»ÐòÁУ¬µ±ÕâÁ½ÖÖÔØÌåͬʱת»¯Èë½Íĸϸ°ûºó£¬±í´ï²úÉúµÄÁ½ÖÖµ°°×¶¼¶¨Î»ÔÚºËÄÚ¡£Èç¹ûX ºÍY ÓÐÏ໥×÷Óã¬Ôò·Ö±ðÈÚºÏÔÚ¶þÕßÉϵÄAD ºÍBD ¾Í»á×éºÏ³ÉΪһ¸öÍêÕûµÄת¼Òò×Ó£¬¼¤»îÓëBD ½áºÏµÄ±¨¸æ»ùÒòµÄ±í´ï£¬´Ó¶øÖªµÀ´ý²âµ°°×¼äÊÇ·ñÓÐÏ໥×÷Óá£

12. ·Ö×Ó¿Ë¡Öг£ÓõŤ¾ßø¼°Á¼ºÃÔØÌåµÄÌõ¼þ£¿

³£ÓõŤ¾ßø

1¡¢ÏÞÖÆÐÔºËËáÄÚÇÐø£ºÊÇϸ¾ú²úÉúµÄÒ»ÀàÄÜʶ±ðºÍÇиîË«Á´DNA ·Ö×ÓÄÚÌØ¶¨µÄ¼î»ù˳ÐòµÄºËËáË®½âø¡£

2¡¢DNA Á¬½Óø£º½«Á½¶ÎDNA ·Ö×ÓÆ´½ÓÆðÀ´µÄø¡£

3¡¢DNA ¾ÛºÏø£º´ß»¯µ¥ºËÜÕËáÁ´ÑÓÉì¡£

4¡¢Äæ×ªÂ¼Ã¸£ºÒÀÀµÓÚRNA µÄDNA ¾ÛºÏø£¬ÕâÊÇÒ»ÖÖÓÐЧµÄת¼RNA ³ÉΪDNA µÄø£¬²úÎïDNA Óֳƻ¥²¹DNA ¡£

5¡¢Ä©¶ËÍÑÑõºËÌǺËËá×ªÒÆÃ¸£º½«ÍÑÑõºËÌǺËËá¼Óµ½DNA µÄ3Ä©¶Ë¡£

6¡¢¼îÐÔÁ×Ëáø£º´ß»¯È¥³ýDNA ¡¢RNA µÈµÄ5Á×Ëá»ùÍÅ¡£

7¡¢ÒÀÀµDNA µÄRNA ¾ÛºÏø£ºÊ¶±ðÌØÒìÐÔÆô¶¯×Ó£¬RNA ת¼¡£

Á¼ºÃÔØÌåµÄÌõ¼þ

1¡¢±ØÐëÓÐ×ÔÉíµÄ¸´ÖÆ×Ó£»

2¡¢ÔØÌå·Ö×ÓÉϱØÐëÓÐÏÞÖÆÐÔºËËáÄÚÇÐøµÄøÇÐλµã£¬¼´¶à¿Ë¡λµã£¬ÒÔ¹©ÍâÔ´DNA ²åÈ룻

3¡¢ÔØÌåÓ¦¾ßÓпɹ©Ñ¡ÔñµÄÒÅ´«±êÖ¾£¬ÒÔÇø±ðÑôÐÔÖØ×é×ÓºÍÒõÐÔÖØ×é×Ó£»

4¡¢ÔØÌå·Ö×Ó±ØÐëÓÐ×ã¹»µÄÈÝÁ¿£»

5¡¢¿Éͨ¹ýÌØ¶¨µÄ·½·¨µ¼Èëϸ°û£»

6¡¢¶ÔÓÚ±í´ïÔØÌ廹Ӧ¾ß±¸ÓëËÞÖ÷ϸ°ûÏàÊÊÓ¦µÄÆô¶¯×Ó¡¢Ç°µ¼Ë³Ðò¡¢ÔöÇ¿×Ó¡¢¼ÓβÐźŵÈDNA µ÷¿ØÔª¼þ¡£

13. SANGERË«ÍÑÑõÁ´ÖÕÖ¹·¨µÄÔ­Àí£¿

´ð£ºDNA Á´ÖкËÜÕËáÒÔ3′,5′-Á×Ëá¶þõ¥¼üÁ¬½Ó£¬ºÏ³ÉDNA ËùÓõĵ×ÎïÊÇ2′-ÍÑÑõºËÜÕÈýÁ×Ëá¡£2′,3′ddNTP ÓëÆÕͨdNTP ²»Í¬£¬ËüÃÇÔÚÍÑÑõºËÌǵÄ3′λÖÃȱÉÙÒ»¸öôÇ»ù¡£ÔÚDNA ¾ÛºÏø×÷ÓÃÏÂͨ¹ýÈýÁ×Ëá»ùÍŲôÈëµ½ÑÓÉìµÄDNA Á´ÖУ¬µ«ÓÉÓÚûÓÐ3′ôÇ»ù£¬²»ÄÜͬºóÐøµÄdNTP ÐγÉÁ×Ëá¶þõ¥¼ü£¬Òò´Ë£¬ÕýÔÚÑÓÉìµÄDNA Á´²»ÄܼÌÐøÑÓÉì¡£ÔÚDNA ºÏ³É·´Ó¦»ìºÏÎïµÄ4ÖÖÆÕͨdNTP ÖмÓÈëÉÙÁ¿µÄÒ»ÖÖddNTP £¬Á´ÑÓÉ콫ÓëżȻ·¢Éúµ«È´Ê®·ÖÌØÒìµÄÁ´ÖÕÖ¹¾ºÕù£¬²úÎïÊÇһϵÁеĺËÜÕËáÁ´£¬Æä³¤¶ÈÈ¡¾öÓÚÒýÎïÄ©¶Ëµ½³öÏÖ¹ýÔçÁ´ÖÕֹλÖüäµÄ¾àÀë¡£ÔÚ4×é¶ÀÁ¢Ã¸·´Ó¦Öзֱð²ÉÓÃ4ÖÖ²»Í¬µÄddNTP £¬½á¹û½«²úÉú4×é¹ÑºËÜÕËᣬËüÃǽ«·Ö±ðÖÕÖ¹ÓÚÄ£°åÁ´µÄA ¡¢C ¡¢G »òT λÖá£

14. ºËËá·Ö×ÓÔÓ½»µÄÔ­Àí¡¢Ìõ¼þ¡¢Ó°ÏìÒòËØ£¿

Ô­Àí£º»¥²¹µÄDNA µ¥Á´Äܹ»ÔÚÒ»¶¨Ìõ¼þϽáºÏ³ÉË«Á´£¬¼´Äܹ»½øÐÐÔÓ½»¡£ÕâÖÖ½áºÏÊÇÌØÒìµÄ£¬¼´Ñϸñ°´ÕÕ¼î»ù»¥²¹µÄÔ­Ôò½øÐУ¬Ëü²»½öÄÜÔÚDNA ºÍDNA Ö®¼ä½øÐУ¬Ò²ÄÜÔÚDNA ºÍRNA Ö®¼ä½øÐС£Òò´Ë£¬µ±ÓÃÒ»¶ÎÒÑÖª»ùÒòµÄºËËáÐòÁÐ×÷³ö̽Õ룬Óë±äÐÔºóµÄµ¥Á´»ùÒò×éDNA ½Ó´¥Ê±£¬Èç¹ûÁ½Õߵļî»ùÍêÈ«Åä¶Ô£¬ËüÃǼ´»¥²¹µØ½áºÏ³ÉË«Á´£¬´Ó¶ø±íÃ÷±»²â»ùÒò×éDNA Öк¬ÓÐÒÑÖªµÄ»ùÒòÐòÁС£

±ØÒªÌõ¼þ£ºÒ»ÊDZØÐèµÄÌØÒìµÄDNA ̽Õ룻¶þÊDZØÐèµÄ»ùÒò×éDNA ¡£

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2¡¢Î¶È£ºÎ¶ȹý¸ß²»ÀûÓÚ¸´ÐÔ£¬Î¶ȹýµÍ£¬ÉÙÊý¼î»ùÅä¶ÔÐγɵľֲ¿Ë«Á´²»Ò×½âÀë¡£

3¡¢µÍÀë×ÓÇ¿¶ÈÏ£¬ºËËáÔÓ½»»ºÂý£¬Ëæ×ÅÀë×ÓÇ¿¶ÈµÄÔö¼Ó£¬·´Ó¦ËÙÂÊÔö¼Ó¡£

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15. PCRµÄ»ù±¾Ô­ÀíºÍ¹ý³Ì£¿

´ð£º»ù±¾Ô­ÀíÊÇÒÀ¾Ýϸ°ûÄÚDNA °ë±£Áô¸´ÖƵĻúÀí£¬ÒÔ¼°ÌåÍâDNA ·Ö×ÓÓÚ²»Í¬Î¶ÈÏÂË«Á´ºÍµ¥Á´¿ÉÒÔ»¥Ïàת±äµÄÐÔÖÊ£¬ÈËΪµØ¿ØÖÆÌåÍâºÏ³ÉϵͳµÄζÈ£¬ÒÔ´Ùʹ˫Á´DNA ±ä³Éµ¥Á´£¬µ¥Á´DNA ÓëÈ˹¤ºÏ³ÉµÄÒýÎïÍË»ð£¬È»ºóÄÍÈÈDNA ¾ÛºÏøÒÔdNTP ΪԭÁÏʹÒýÎïÑØ×ŵ¥Á´Ä£°åÑÓÉìΪ˫Á´DNA ¡£

PCR È«¹ý³Ì¼´¸ßαäÐÔ¡¢µÍÎÂÍË»ð¡¢ÖÐÎÂÑÓÉì3¸ö²½Öè¹¹³ÉµÄÒ»¸öÑ­»·£¬´ËÑ­»·µÄ·´¸´½øÐУ¬¾Í¿ÉʹĿµÄDNA µÃÒÔѸËÙÀ©Ôö¡£

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2¡¢ÍË»ð£ºÒýÎµ¥Á´DNA ÔÓ½»Á´¡£

3¡¢ÑÓÉ죺ζÈÖÁ70 ¡æ×óÓÒ£¬ Taq DNA¾ÛºÏøÒÔ4ÖÖdNTP ΪԭÁÏ£¬ÒÔÄ¿µÄDNA Ϊģ°å£¬´ß»¯ÒÔÒýÎï

3′Ä©¶ËΪÆðµãµÄ5′→3′DNA Á´ÑÓÉì·´Ó¦£¬ÐγÉÐÂÉúDNA Á´¡£

кϳɵÄÒýÎïÑÓÉìÁ´¾­¹ý±äÐÔºóÓÖ¿É×÷ΪÏÂÒ»ÂÖÑ­»··´Ó¦µÄÄ£°åPCR £¬Èç´Ë·´¸´£¬Ê¹Ä¿µÄDNA µÃµ½¸ßЧ¿ìËÙÀ©Ôö¡£

16. PCRµÄ·´Ó¦Ìõ¼þ£¿

1¡¢PCR ·´Ó¦µÄ»º³åÒº£ºTris-HCl »º³åÒº¡£KCl ´Ù½øÒýÎïµÄÍË»ð£¬Å¨¶ÈÌ«¸ßʱ»áÒÖÖÆTaq DNA¾ÛºÏø»îÐÔ¡£±ØÒªÊ±¼ÓÈëÊÊÁ¿¶þ¼×»ùÑÇí¿(DMSO)»ò¼×õ£°·ÀûÓÚÆÆ»µÄ£°å¶þ¼¶½á¹¹£¬Ìá¸ßPCR ·´Ó¦ÌØÒìÐÔ¡£

2¡¢Ã¾Àë×ÓŨ¶È£ºTaq DNA¾ÛºÏø»îÐÔÐèÒªMg 2+¡£Mg 2+Ũ¶È¹ýµÍ£¬»áÏÔÖø½µµÍø»îÐÔ¡£Mg 2+Ũ¶È¹ý¸ßÓÖʹø´ß»¯·ÇÌØÒìÐÔÀ©ÔöÔöÇ¿¡£Mg 2+Ũ¶È»¹»áÓ°ÏìÒýÎïµÄÍË»ð¡¢Ä£°åÓëPCR ²úÎïµÄ½âÁ´Î¶È£¬´Ó¶øÓ°ÏìÀ©ÔöƬ¶ÎµÄ²úÂÊ¡£

3¡¢µ×ÎïŨ¶È£º dNTPs Ũ¶È¹ý¸ß¿É¼Ó¿ì·´Ó¦ËÙ¶È£¬Ò²Ôö¼Ó¼î»ùµÄ´íÅäÂʺÍʵÑé³É±¾¡£½µµÍŨ¶È»áµ¼Ö·´Ó¦ËÙ¶ÈϽµ£¬¿ÉÌá¸ß·´Ó¦µÄÌØÒìÐÔ¡£4ÖÖdNTP ±ØÐëÒÔµÈĦ¶ûŨ¶ÈÅäÖÆ£¬ÒÔ¼õÉÙPCR ·´Ó¦µÄ´íÅäÎó²î²¢Ìá¸ßʹÓÃЧÂÊ¡£

4¡¢Taq DNA¾ÛºÏø£º75-80¡æÊ±¾ßÓÐ×î¸ßµÄ¾ÛºÏø»îÐÔ£¬150¸öºËÜÕËá/Ã룻¾ßÓÐÁ¼ºÃµÄÈÈÎȶ¨ÐÔ£¬95¡æÈÔÓлîÐÔ¡£

5¡¢ÒýÎÒýÎïŨ¶ÈÆ«¸ß»áÒýÆð´íÅä»ò·ÇÌØÒìÐÔÀ©Ôö¡¢Éú³ÉÒýÎï¶þ¾ÛÌ壬ʹĿµÄDNA Ƭ¶Î²úÂÊϽµ¡£ÍË»ðζÈÓëÒýÎïTm ÖµÓйØ£¬ÒýÎïTm ÖµÔÚ55-80 ¡æ ·¶Î§½ÏΪÀíÏë¡£

6¡¢·´Ó¦Î¶ȺÍÑ­»·´ÎÊý£ºÑ­»·´ÎÊý¾ö¶¨PCR À©Ôö³Ì¶È¡£PCR Ñ­»·´ÎÊýÖ÷Ҫȡ¾öÓÚÄ£°åDNA µÄŨ¶È¡£Ò»°ãµÄÑ­»·´ÎÊýÑ¡ÔÚ30¡«40´ÎÖ®¼ä£¬Ñ­»·´ÎÊýÔ½¶à£¬·ÇÌØÒìÐÔ²úÎïµÄÁ¿ÒàËæÖ®Ôö¶à¡£

17. Ó°Ïì´ó³¦¸Ë¾úϵͳÍâÔ´»ùÒò±í´ïµÄÒòËØ£¿

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18. ´ó³¦¸Ë¾úϵͳ±í´ïÍâÔ´»ùÒò±ØÐë¾ß±¸µÄÌõ¼þ£¿

´ð£º1¡¢ÒªÇóÍâÔ´»ùÒòµÄ±àÂëÇø²»Äܺ¬ÓÐÄÚº¬×Ó£»

2¡¢±í´ïµÄÍâԴƬ¶ÎҪλÓڴ󳦸˾úÆô¶¯×ÓµÄÏÂÓΣ¬²¢ÐγÉÕýÈ·µÄÔĶÁ¿ò¼Ü£»

3¡¢×ªÂ¼³öµÄmRNA ±ØÐëÓÐÓë´ó³¦¸Ë¾ú16S rRNA3£¬Ä©¶ËÏàÆ¥ÅäµÄSD ÐòÁУ¬²ÅÄܱ»ÓÐЧµÄ·­Òë³Éµ°°×ÖÊ¡£

4¡¢µ°°×²úÎï±ØÐëÎȶ¨£¬²»Ò×±»Ï¸°ûÄÚµ°°×ø¿ìËÙ½µ½â£¬ÇÒ¶ÔËÞÖ÷ÎÞº¦¡£

19. ÕæºËϸ°û±í´ïÍâÔ´»ùÒòµÄÌõ¼þ£¿

´ð£º1¡¢Ê×ÏȱØÐë¾ß±¸²¸È鶯Îïϸ°û±í´ïµÄ¹¦ÄÜÔª¼þ¡£ÒªÇó²¸È鶯Îïϸ°û±í´ïÔØÌå´øÓÐÄÜÔÚÕæºËϸ°ûÖбí´ïÍâÔ´»ùÒòµÄÕæºËת¼µ÷¿ØÔª¼þ£»

2¡¢×¢ÒâÑ¡ÔñתȾµÄÊÜÌåϸ°û£¬²»Í¬ÀàÐ͵Äϸ°û¾ßÓв»Í¬µÄÌØÐÔ£»

3¡¢×¢ÒâÑ¡ÔñÊʵ±µÄÑ¡Ôñ±ê¼Ç¡£

20. ת»ùÒò¶¯ÎïµÄ¸ÅÄî¡¢Ô­Àí¼°Ó¦Óã¿

´ð£º¸ÅÄî¡¢Ô­Àí£º½èÖú»ùÒò¹¤³Ì¼¼Êõ°ÑÍâÔ´Ä¿µÄ»ùÒòµ¼ÈëÉúֳϸ°û¡¢ÅßÌ¥¸Éϸ°ûºÍÔçÆÚÅßÌ¥£¬²¢ÔÚÊÜÌåȾɫÌåÉÏÎȶ¨ÕûºÏ£¬Ê¹Ö®¾­¹ý¸÷ÖÖ·¢Óý;¾¶µÃµ½ÄܰÑÍâÔ´Ä¿µÄ»ùÒò´«¸ø×Ó´úµÄ¸öÌå¡£

Ó¦Óà £º£¨1£©ÔÚ»ùÒò±í´ïµ÷¿ØÑо¿·½ÃæµÄÓ¦ÓãºÀûÓÃת»ùÒò¶¯Îï¿É×÷ΪÔÚÌåÄÚÑо¿ÍâÔ´»ùÒò±í´ïµ÷¿ØµÄ“·´Ó¦Æ÷”£» £¨2£©ÓÃÓÚ»ùÒò²úÆ·µÄÖÆ±¸£º°Ñת»ùÒò¶¯Îï¿´×÷ÊÇÒ»ÖÖ¸öÌå±í´ïϵͳ£¬Ê¹µ¼ÈëµÄÄ¿µÄ»ùÒò

±í´ï£¬ÈËÃǾͿÉÒԴӸö¯ÎïµÄÈéÖ­ºÍѪҺÀï»ñµÃÄ¿µÄ»ùÒò²úÎï¡£

21. »ùÒòÇóýµÄ»ù±¾³ÌÐò£¿

´ð£ºÍ¨¹ýDNA Í¬Ô´ÖØ×飬ʹÌض¨µÄÄÚÔ´»ùÒò±»ÆÆ»µ¶øÔì³É¹¦ÄÜɥʧ£¬È»ºóͨ¹ý½éµ¼µÃµ½¸Ã»ùÒòɥʧµÄÉúÎïÄ£Ð͵Ĺý³Ì¡£

ÒÔСÊóµÄij»ùÒòÇóýΪÀý£º

1¡¢°ÐÔØÌåµÄͬԴÐòÁÐÒª×ã¹»³¤£¬Òªº¬ÓÐɸѡÓõıêÖ¾»ùÒò£»

2¡¢ÅßÌ¥¸Éϸ°ûµÄÌåÍâÅàÑø£»

3¡¢°ÐÔØÌåµ¼ÈëÅßÌ¥¸Éϸ°û£»

4¡¢Í¬Ô´ÖØ×éÅßÌ¥¸Éϸ°ûµÄɸÑ¡£»

5¡¢»ùÒòÇóýÅßÌ¥¸Éϸ°û×¢ÉäÈëÅßÅÝ£»

6¡¢ÅßÅÝÖ²Èë¼ÙÔÐСÊóµÄ×Ó¹¬ÖУ»

7¡¢ÔÓ½»ÓýÖÖ»ñµÃ´¿ºÏµÄ»ùÒòÇóý¶¯Îï¡£

22£®¶ÔÌìÈ»ÖÊÁ£µÄÈ˹¤¹¹½¨Ö÷Òª±íÏÖÔÚÄÄЩ·½Ã棿

´ð£ºÌìÈ»ÖÊÁ£ÍùÍù´æÔÚ×ÅȱÏÝ£¬Òò¶ø²»ÊʺÏÓÃ×÷»ùÒò¹¤³ÌµÄÔØÌ壬±ØÐë¶ÔÖ®½øÐиÄÔì¹¹½¨£º

1¡¢¼ÓÈëºÏÊʵÄÑ¡Ôñ±ê¼Ç»ùÒò£¬ÈçÁ½¸öÒÔÉÏ£¬Ò×ÓÚÓÃ×÷Ñ¡Ôñ£¬Í¨³£ÊÇ¿¹ÉúËØ»ùÒò¡£

2¡¢Ôö¼Ó»ò¼õÉÙºÏÊʵÄøÇÐλµã£¬±ãÓÚÖØ×é¡£

3¡¢Ëõ¶Ì³¤¶È£¬ÇÐÈ¥²»±ØÒªµÄƬ¶Î£¬Ìá¸ßµ¼ÈëЧÂÊ£¬Ôö¼Ó×°ÔØÁ¿¡£

4¡¢¸Ä±ä¸´ÖÆ×ÓÇé¿ö£¬±äÑϽôΪËɳÚ£¬±äÉÙ¿½±´Îª¶à¿½±´¡£

5¡¢¸ù¾ÝÌØÊâÐèÇó¼Ó×°ÌØÊâµÄ»ùÒòÔª¼þ¡£

23. ÀûÓÃË«ÍÑÑõÄ©¶ËÖÕÖ¹·¨£¨Sanger ·¨£©²â¶¨DNA Ò»¼¶½á¹¹µÄÔ­ÀíÓë·½·¨£¿

´ð£º²ÉÓÃ2’£¬3’-Ë«ÍÑÑõºËÜÕËᣬÓÉÓÚËüȱÉÙÐγÉ3’£¬5’Á×Ëá¶þÖ¬¼üËùÐèÒªµÄ3-OH, Ò»µ©²ÎÈëµ½DNA Á´ÖУ¬´ËDNA Á´¾Í²»ÄܽøÒ»²½ÑÓ³¤¡£¸ù¾Ý¼î»ùÅä¶ÔÔ­Ôò£¬Ã¿µ±DNA ¾ÛºÏøÐèÒªdNMP ²ÎÈëµ½Õý³£ÑÓ³¤µÄDNA Á´ÖÐʱ£¬¾ÍÓÐÁ½ÖÖ¿ÉÄÜÐÔ£¬Ò»ÊDzÎÈëddNTP, ½á¹ûµ¼ÖÂÍÑÑõºËÜÕËáÁ´ÑÓ³¤µÄÖÕÖ¹£¬¶þÊDzÎÈëdNTP, ʹDNA Á´ÈԿɼÌÐøÑÓ³¤Ö±ÖÁ²ÎÈëÏÂÒ»¸öddNTP ¡£¸ù¾ÝÕâÒ»·½·¨£¬¾Í¿ÉµÃµ½Ò»×éÒÔddNTP ½áβµÄ³¤¶Ì²»Ò»µÄDNA Ƭ¶Î¡£·´Ó¦ÖÕÖ¹ºó£¬·ÖËĸöÓ¾µÀ½øÐеçÓ¾£¬ÒÔ·ÖÀ볤¶Ì²»Ò»µÄºËËáÆ¬¶Î(³¤¶ÈÏàÁÚÕß½ö²îÒ»¸ö¼î»ù) ¡£ÔÙ¸ù¾ÝƬ¶Î3’¶ËµÄË«ÍÑÑõ¼î»ùµÄÇé¿ö£¬±ã¿ÉÒÀ´ÎÔĶÁºÏ³ÉƬ¶ÎµÄ¼î»ùÅÅÁÐ˳Ðò¡£

24. µäÐ͵ÄDNA ÖØ×éʵÑéͨ³£°üÀ¨ÄÄЩ²½Ö裿

´ð£º¢ÙÍâÔ´»ùÒòµÄ»ñµÃ¡£ÈçøÇз¨¡¢·´×ªÂ¼·¨È˹¤ºÏ³É·¨£»

¢ÚÔØÌåµÄ»ñµÃ¡£ÈçÖÊÁ£¡¢ÊɾúÌ壻

¢Û»ñµÃÖØ×éÌ壻

¢ÜÖØ×éÌåµ¼ÈëÊÜÌåϸ°ûºË¡£×ª»¯¡¢×ªµ¼¡¢ÔÓ½»¡¢Ï¸°ûÈںϡ¢ÏÔ΢עÉä¼¼Êõ£»

¢Ý¶ÔÎüÊÕÖØ×éDNA µÄϸ°û½øÐÐɸѡ¼ø¶¨£»

¢Þ¶Ôº¬ÓÐÖØ×éDNA ϸ°û½øÐдóÁ¿ÅàÑø£¬¼ì²âÍâÔ´»ùÒòÊÇ·ñ±í´ï¡£

25. Ìá³öÒ»¸ö½«ÕæºËϸ°ûÖеÄmRNA ÓëÆäËûÀàÐ͵ÄRNA ·Ö¿ªµÄ·½·¨¡£

´ð£ºÕæºËϸ°ûµÄmRNA ·Ö×Ó×îÏÔÖøµÄ½á¹¹ÌØÕ÷ÊǾßÓÐ3’¶ËµÄPoly(A)β°Í¡£A ÓëdT ¿É¼î»ù»¥²¹Åä¶Ô£¬Òò¶ø¿É²ÉÓùѾۣ¨dT £©-ÏËÎ¬ËØÖù²ãÎö·¨¡£´Ë·¨ÀûÓÃmRNA3’Ä©¶Ëº¬Poly £¨A+£©µÄÌØµã£¬ÔÚ¸ßÑλº³åÒºµÄ×÷ÓÃÏ£¬µ±×ÜRNA Á÷¾­¹Ñ¾Û£¨dT £©ÏËÎ¬ËØÖùʱ£¬mRNA ±»ÌØÒìµØ½áºÏÔÚÖùÉÏ£¬µ±Öð½¥½µµÍÑεÄŨ¶Èʱ£¬mRNA ±»Ï´ÍÑ£¬¾­¹ýÁ½´Î¹Ñ¾Û£¨dT £©ÏËάÖùºó£¬¼´¿ÉµÃµ½½Ï¸ß´¿¶ÈµÄmRNA ¡£

26. ¼òÊö½Íĸ˫ÔÓ½»µÄÔ­Àí¡£

´ð£ºÔ­Àí£ººÜ¶àÕæºËÉúÎïµÄλµãÌØÒìת¼¼¤»îÒò×Óͨ³£¾ßÓÐÁ½¸ö¿É·Ö¸î¿ªµÄ½á¹¹Óò£¬¼´DNA ÌØÒì½áºÏÓòBD Óëת¼¼¤»îÓòAD ¡£Á½¸ö½á¹¹Óò¸÷¾ß¹¦ÄÜ£¬»¥²»Ó°Ïì¡£µ«Ò»¸öÍêÕûµÄ¼¤»îÌØ¶¨»ùÒò±í´ïµÄ¼¤»îÒò×Ó±ØÐëͬʱº¬ÓÐÕâÁ½¸ö½á¹¹Óò£¬·ñÔòÎÞ·¨Íê³É¼¤»î¹¦ÄÜ¡£²»Í¬À´Ô´¼¤»îÒò×ÓµÄBD ÇøÓëAD ½áºÏºóÔòÌØÒìµØ¼¤»î±»BD ½áºÏµÄ»ùÒò±í´ï¡£

½«Á½¸ö´ý²âµ°°×·Ö±ðÓëÕâÁ½¸ö½á¹¹ÓòÖÆ³ÉÈںϵ°°×£¬²¢¹²±í´ïÓÚͬһ¸ö½Íĸϸ°ûÄÚ¡£Èç¹ûÁ½¸ö´ý²âµ°°×¼äÄÜ·¢ÉúÏ໥×÷Ó㬾ͻáͨ¹ý´ý²âµ°°×µÄÇÅÁº×÷ÓÃʹAD ÓëBD ÐγÉÒ»¸öÍêÕûµÄת¼¼¤»îÒò×Ó²¢¼¤»îÏàÓ¦µÄ±¨¸æ»ùÒò±í´ï¡£Í¨¹ý¶Ô±¨¸æ»ùÒò±í´ïµÄ²â¶¨¿ÉÒÔÖªµÀ´ý²âµ°°×·Ö×Ó¼äÊÇ·ñ·¢ÉúÁËÏ໥×÷Ó᣸ÃϵͳÓÉÈý¸ö²¿·Ö×é³É£º

(1)ÓëBD Èںϵĵ°°×±í´ïÔØÌ壬±»±í´ïµÄµ°°×³ÆÓÕ¶üµ°°×¡£

(2)ÓëAD Èںϵĵ°°×±í´ïÔØÌ壬±»±í´ïµÄµ°°×³Æ°Ðµ°°×¡£

(3)´øÓÐÒ»¸ö»ò¶à¸ö±¨¸æ»ùÒòµÄËÞÖ÷¾úÖê¡£¾úÖê¾ßÓÐÏàÓ¦µÄȱÏÝÐÍ¡¢¿¹ÐÔ»ùÒò£¬ÓÐÀûÓÚʵÑéºóÆÚÔÓ½»ÖÊÁ£µÄ¼ø¶¨Óë·ÖÀë¡£

27. ¼òÊöµ°°×ÖʵçÓ¾¹ý³Ì¼°Æä×¢ÒâÊÂÏî¡£

¹ý³Ì£º

1¡¢½ºµÄÅäÖãº

2¡¢ÑùÆ·´¦Àí£º½«ÑùÆ·¼ÓÈëµÈÁ¿µÄ2×SDS ÉÏÑù»º³åÒº£¬100¡æ¼ÓÈÈ3-5min £¬ÀëÐÄ£¬È¡ÉÏÇå×÷SDS-PAGE ·ÖÎö£¬Í¬Ê±½«SDS µÍ·Ö×ÓÁ¿µ°°×±ê׼Ʒ×÷ƽÐд¦Àí¡£

3¡¢ÉÏÑù£ºÈ¡10μL ÓÕµ¼ÓëδÓÕµ¼µÄ´¦ÀíºóµÄÑùÆ·¼ÓÈëÑùÆ·³ØÖÐ, ²¢¼ÓÈë20μL µÍ·Ö×ÓÁ¿µ°°×±ê׼Ʒ×÷¶ÔÕÕ¡£

4¡¢µçÓ¾£ºÔÚµçÓ¾²ÛÖмÓÈë1 µçÓ¾»º³åÒº£¬Á¬½ÓµçÔ´£¬¶Ô×¼Õý¸º¼«£¬µçÓ¾ÖÁäå·ÓÀ¼ÐÐÖÁµçÓ¾²Û϶ËÍ£Ö¹¡£

5¡¢È¾É«£º½«½º´Ó²£Á§°åÖÐÈ¡³ö£¬¿¼Âí˹ÁÁÀ¼È¾É«ÒºÈ¾É«¡£


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