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·Ö×ÓÉúÎïѧ¸¨µ¼±Ê¼Ç

±¾Õ¾Ð¡±à Ãâ·ÑöλÔÓéÀÖ¹Ù·½appÏÂÔØÍø/2015-04-13

£¨Ç°4ÕÂ×¢Òâ¸ÅÄî¾ÍÐÐÁË£¬ÖصãÊÇת×ù×Ó£¬RNA±à¼­£©
Chapter1ÕæºËÉúÎï»ùÒò×é½á¹¹Ó빦ÄܵÄÌØµã±¾ÕÂÓ¦ÕÆÎյĻù±¾¸ÅÄî
ϸ°ûºË»ùÒò×éµÄ´óС£»
Cֵì¶Ü£»
ÖØ¸´ÐòÁУ»
»ùÒò¼Ò×壻
ÕæºË»ùÒòµÄ¶ÏÁѽṹ
»ùÒò¼Ò×壨gene family) Ö¸ºËÜÕËáÐòÁлò±àÂë²úÎïµÄ½á¹¹¾ßÓÐÒ»¶¨³Ì¶ÈͬԴÐÔµÄÒ»×é»ùÒò¡£
 
¼Ù»ùÒò£¨pseudogene) ÔÚ¶à»ùÒò¼Ò×åÖÐÓеijÉÔ±²¢²»Äܱí´ï³öÓй¦ÄܵIJúÎï¡£
1¡¢ºËËáÐòÁÐÏàͬ£º¼´Îª¶à¿½±´»ùÒòÈçrRNA»ùÒò¼Ò×壬tRNA»ùÒò¼Ò×壬×éµ°°×»ùÒò¼Ò×å¡£
2¡¢ºËËáÐòÁи߶ÈͬԴ£ºÈçÈËÀàÉú³¤¼¤ËØ»ùÒò¼Ò×å°üÀ¨ÈýÖÖ¼¤ËصĻùÒò£¬ÈËÉú³¤¼¤ËØ¡¢ÈËÌ¥ÅÌ´ÙÈéËØºÍ´ßÈéËØ£¬ËüÃÇÖ®¼ä¸ß¶ÈͬԴ¡£
3¡¢±àÂë²úÎïÓÐͬԴ¹¦ÄÜ£º»ùÒòÐòÁеÄÏàËÆÐÔ¿ÉÄܽϵÍ£¬µ«»ùÒò±àÂëµÄ²úÎï¾ßÓи߶ȱ£ÊصŦÄÜÇø¡£Èçsrc°©»ùÒò¼Ò×å
4¡¢±àÂë²úÎï¾ßÓÐС¶Î±£ÊØ»ùÐò£ºÓÐЩ»ùÒò¼Ò×åÖи÷³ÉÔ±µÄDNAÐòÁпÉÄܲ»Ã÷ÏÔÏà¹Ø£¬¶øËù±àÂëµÄ²úÎïÈ´Óй²Í¬µÄ¹¦ÄÜÌØÕ÷£¬´æÔÚС¶Î±£Êصݱ»ùËá»ùÐò¡£
 
»ùÒò³¬¼Ò×壨gene superfamily) Ö¸Ò»×éÓɶà»ùÒò¼Ò×å¼°µ¥»ùÒò×é³ÉµÄ¸ü´óµÄ»ùÒò¼Ò×壬ËüÃǵĽṹÓв»Í¬µÄͬԴÐÔ£¬µ«¹¦Äܲ¢²»Ò»¶¨Ïàͬ¡£ÈçÃâÒßÇòµ°°×»ùÒò³¬¼Ò×å¡£
 
ÕæºË»ùÒòµÄ¶ÏÁѽṹ
¶ÏÁÑ»ùÒò£¨split gene) »ùÒòÓë»ùÒò¼äµÄ·Ç±àÂëÐòÁÐΪ¼ä¸ôDNA£¨ spacer DNA).
ÄÚº¬×Ó£¨intron£©ÎÞ±àÂëÒâÒåµÄDNAƬ¶Î
ÍâÏÔ×Ó£¨extron£©¾ßÓбàÂëÒâÒåµÄDNAƬ¶Î
Chapter2 Ò¶ÂÌÌå»ùÒò×é
±¾ÕÂÓ¦ÕÆÎյĻù±¾¸ÅÄî
Ò¶ÂÌÌåDNAµÄÐÅÏ¢º¬Á¿£»
Ò¶ÂÌÌå»ùÒò×éµÄ½á¹¹£»
Ò¶ÂÌÌå»ùÒòµÄ×é³É£»£¨¼ÇÒäÿ¸ö´ó±êÌ⣬Á˽â¾Í¿ÉÒÔÁË£©
Ò¶ÂÌÌå»ùÒòµÄһЩ½á¹¹ÌØÕ÷¡£
¡ïp33. RNA±à¼­
Chapter3ÏßÁ£Ìå»ùÒò×é
±¾ÕÂÓ¦ÕÆÎյĻù±¾¸ÅÄî
ÏßÁ£Ìå»ùÒò×éµÄ´óС£»
ÏßÁ£Ìå»ùÒò×éµÄ×éÖ¯½á¹¹£»
ÏßÁ£Ìå»ùÒò×éµÄ×é³É£»
ÏßÁ£Ìå»ùÒòµÄÒ»Ð©ÌØÕ÷£»
¡ïp44. RNA±à¼­£»£¨×¢Òâ¸ÅÄ·ÖÀ࣬¡ïÒâÒ壩
ÒÅ´«ÐÅÏ¢ÔÚ»ùÒò×éÖ®¼äµÄÁ÷¶¯¡££¨Êʵ±¹Ø×¢£©
Chapter4¿ÉÒÆÎ»ÒÅ´«Òò×Ó
±¾ÕÂÓ¦ÕÆÎյĻù±¾¸ÅÄî
¿ÉÒÆÎ»Òò×ÓµÄÀàÐÍ£»
ת×ù×Ó£»
LTRÄæ×ªÂ¼×ª×ù×Ó£»
ÎÞLTRÄæ×ªÂ¼×ª×ù×Ó£»
 
תλÒò×Ó(transposable element) ¿ÉÒÆ¶¯µÄ»ùÒò³É·Ö£¬Ö¸ÄÜÔÚÒ»¸öDNA·Ö×ÓÄÚ²¿»òÁ½¸öDNA·Ö×ÓÖ®¼äÒÆ¶¯µÄƬ¶Î¡£ÔÚϸ¾úÖпÉÖ¸ÔÚÖÊÁ£ºÍȾɫÌåÖ®¼ä»òÔÚÖÊÁ£ºÍÖÊÁ£Ö®¼äÒÆ¶¯µÄƬ¶Î¡£
תλÒò×ÓµÄÖ÷ÒªÀàÐÍ
²åÈëÐòÁУ¨insertion sequence,IS)
ת×ù×Ó£¨transposon,Tn)
Äæ×ªÂ¼×ª×ù×Ó£¨retroposons or retro transposon £©
ת×ùµÄÊɾúÌ壨transposable phage )
 
²åÈëÐòÁÐ(Insertion sequence) Ò»Àà¼òµ¥×ªÎ»Òò×Ó£¬³¤¶ÈÔ¼700~2000bp£¬ÓÉÒ»¸öתλø»ùÒò¼°Á½²àµÄ·´ÏòÖØ¸´ÐòÁУ¨inverted repeat sequence, IR)×é³É£¬²»´øÈÎºÎÆäËü»ùÒò¡£×ªÎ»Ê±¸´ÖÆËÞÖ÷°ÐλµãһС¶ÎDNA£¨4~15bp£©ÐγÉÁ½¶ËµÄÕýÏòÖØ¸´ÐòÁС£
 
ת×ù×Ó£¨transposon,Tn) Ò»Àà½Ï´óµÄ¿ÉÒÆ¶¯³É·Ö¡£³ýÓйØ×ª×ùµÄ»ùÒòÍ⣬ÖÁÉÙ´øÓÐÒ»¸öÓëת×ù×÷ÓÃÎ޹ز¢¾ö¶¨ËÞÖ÷¾úÒÅ´«ÐÔ×´µÄ»ùÒò¡£×ª×ù×ÓÖеÄתλø³£³ÆÎª×ª×ùø£¬Æä¹¦ÄÜÊǽ鵼ת×ù×Ó²åÈëµ½DNAµÄÆäËü²¿Î»¡£
ת×ù×ÓÓë»ùÒò±í´ïµÄ¹ØÏµ£º²åÈë±àÂëÇø£¬²åÈë5’²àÏòÐòÁУ¬¿ÉÔÚ²»Í¬Ö²ÎïÖÐÆð×÷ÓÃ
1984ÄêMcClintock£¨°Í°ÍÀ­£®Âó¿ËÁÖÍпˣ©¾ÍÌá³öת×ù×ÓÔÚÖ²Îï»ùÒò×éµÄÖØ½¨ÖÐÆðןÜÖØÒªµÄ×÷Óá£×ª×ù×ÓÔÚµ÷½ÚºÍ±àÂëÇøÓòµÄ²åÈëºÍÇгý¶¼Äܸıä»ùÒòµÄ±àÂ빦Äܺͱí´ïģʽ£¬µ«ÔÚ¿¹²¡»ùÒò·Ö×ÓÉúÎïѧµÄÑо¿ÖУ¬ÉÐδÓÐÖ¤¾ÝÖ±½ÓÖ¤Ã÷¿¹²¡»ùÒò×ùÖÐеÄר»¯ÐÔ¿¹ÐÔ»ùÒòµÄ²úÉúÊÇÓÉת×ù×ӵIJåÈë»òÇгýËùÖ¡£²»¹ýÒÑÓÐÊÔÑé±íÃ÷£¬ÓÉת×ù×ÓÓÕ·¢µÄ»ùÒò¸Ä±äÄÜÒýÆð¿¹²¡»ùÒòµÄʧ»îºÍ¶àÑù»¯¡£×ª×ù×Óͨ³£»áÔì³ÉÆÆ»µ£¬¶øÔÚ±¾ÀýÖУ¬ËüÃÇ¿´À´¶Ô¼ÄÖ÷ÓÐÀû¡£¼ÓÖÝ´óѧ´÷ά˹·ÖУ½ø»¯ÒÅ´«Ñ§¼Ò£Ô£ï£ä£ä £Ó£ã£è£ì£å£î£ë£åºÍͬÊ£ģá£ö£é£ä £Â£å£ç£õ£îżȻ¼ä·¢ÏÖ¹ûÓ¬¼ÓÖÝÖÖȺÌåÄÚÓÐÒ»Ìõº¬£±£°Íò¸ö£Ä£Î£Á¼î»ù¶ÔµÄȾɫÌ寬¶Î£¬Ëù°üº¬µÄÈ«²¿»ùÒò²»´æÔÚ¸öÌå²îÒì¡£Ô­Òò¿ÉÄÜÊǸÃÏàÍ¬ÇøÓòÖÐij¸öÌØ±ðµÄµÈλ»ùÒòѸËÙÀ©É¢µ½ÁËÕû¸öÖÖȺ£¬Í¬Ê±ÉÓ´øÉÏËü¸½½üµÄ¸÷µÈλ»ùÒò£Ã£ù£ð£¶£ç£±»ùÒò£¬ËüÓëÒ»¸ö“ÌøÔ¾»ùÒò”ÏàÁ¬£¬¸ºÔðÇå³ýɱ³æ¼ÁºÍÆäËû¶¾ÎïµÄ¶¾ÐÔ¡£ÊÔÑé±íÃ÷£¬µ±×ª×ù×Ó´æÔÚʱ£¬£Ã£ù£ð£¶£ç£±»ùÒò±È½Ï»îÔ¾£¬Õâ¿ÉÄÜÊÇÓÉÓÚÌøÔ¾¹ý³Ì´ò¿ªÁËij¸ö“»ùÒò¿ª¹Ø”£¬¶ø£Ã£ù£ð£¶£ç£±»ùÒòͨ³£ÊÇ´¦ÓڹرÕ״̬µÄ¡£
 
Äæ×ªÂ¼×ª×ù×Ó£¨retroposons or retrotransposon £©£º Äæ×ªÂ¼×ª×ù×ÓÓֳƓ·´×ªÎ»×Ó”¡£ÕâЩÁ÷¶¯µÄÒÅ´«ÔªËØÊ×Ïȱ»×ªÂ¼³ÉRNA£¬È»ºóÔÙ±»Óɸ÷´×ªÎ»×Ó±¾Éí²úÉúµÄÒ»ÖÖÄæÏò×ªÂ¼Ã¸ÖØÐÂת±ä³ÉDNA¡£¸ÃDNA°æ±¾¿ÉÔÚÈκÎλÖýáºÏ½ø»ùÒò×éÖС£
 
LTRÄæ×ªÂ¼×ª×ù×Ó p58£ºÔڽṹ¡¢×ªÂ¼ÌØÐÔºÍת×ù»úÖÆÉÏÊ®·ÖÀàËÆÓÚÄæ×ªÂ¼²¡¶¾µÄÔ­²¡¶¾£¬ÔÚÆäÁ½¶Ë¾ßÓ㤵ÄͬÏàÖØ¸´ÐòÁУ¨LTRs£©
ÎÞLTRÄæ×ªÂ¼×ª×ù×Ó p63£ºÓÐÓëÄæ×ªÂ¼×ª×ù×ÓÀàËÆµÄÐòÁнṹ£¬µ«Á½¶ËȱÉÙ³¤µÄͬÏàÖØ¸´ÐòÁС£µäÐ͵ÄÀý×ÓÊdz¤É¢²¼Ôª¼þ£¨long interspersed element£¬LINE£©
 
ת×ùµÄÊɾúÌ壨transposable phage ) £º¾ßÓÐת×ù¹¦ÄܵÄÈÜÔ´ÐÔÊɾúÌå
 
Chapter5 ºËËáµÄ·Ö×Ó²Ù×÷
5.1 ÏÞÖÆÐÔÄÚÇÐø¸ÅÄî¡¢·ÖÀà¡¢ÐÔÖÊ£¨×öÒ»°ãÐÔµÄÁ˽⣩
ÏÞÖÆÐÔÄÚÇÐø£ºÒ»ÀàÄÜʶ±ðË«Á´DNAÖж̵ÄÌØ¶¨¼î»ùÐòÁУ¬²¢ÔÚÐòÁÐÄÚ»òÅÔ²àÒ»¶¨¾àÀëÄÚÌØÒìÇиîË«Á´DNAµÄºËËáË®½âø¡£ÊÇÌåÍâ¼ôÇÐDNAµÄÖØÒª¹¤¾ß¡£·ÖΪI£¬II£¬IIIÐÍ
ͬÁÑø£ºÁ½ÖÖøµÄʶ±ðºËÜÕËá˳ÐòºÍÇиîλµã¶¼Ïàͬ£¬ËüµÄÇø±ðÖ»ÊÇÔÚÓÚ£¬µ±Ê¶±ð˳ÐòÖÐÓм׻ù»¯µÄºËÜÕËáʱ£¬Ò»ÖÖ¿ÉÒÔÇи¶øÁíÒ»ÖÖ²»ÄÜÇиî¡£
ͬβø£ºÁ½ÖÖøµÄʶ±ðÐòÁв»ÍêÈ«Ïàͬ£¬µ«ÊÇÇиîºó²úÉúµÄÕ³ÐÔÄ©¶ËÊÇÏàͬµÄ¡£
ÏÞÖÆÐÔÄÚÇÐøø´Ù·´Ó¦µÄÌõ¼þ£¨ÐèҪעÒ⣩
1£®DNAµÄ´¿¶È
2£®DNAµÄ¼×»ù»¯³Ì¶È
3£®Ã¸Çеķ´Ó¦Î¶È£¬Ò»°ãΪ37¡æ
4£®DNAµÄ·Ö×ӽṹ
5£®ÈÜÒºÖеÄÀë×ÓÇ¿¶ÈºËÖÖÀà
6£®»º³åÒºµÄphÖµ
ÐÇ»îÐÔ£¨star act£©£ºµ±Ìõ¼þ¸Ä±äʱ£¬¿ÉÄܸıäøÇÐʶ±ðÐòÁеÄרһÐÔ£¬ÕâÖÖøÇÐÌØÒìÐÔ½µµÍµÄÏÖÏó³ÆÎªÐÇ»îÐÔ»òÐǺŻîÐÔ
ÒýÆðÐÇ»îÐÔµÄÒòËØ
1. ¸ÊÓ͵ÄŨ¶È¹ý¸ß >5%
2. ø¹ýÁ¿ >100µ¥Î»/ug
3. µÍÀë×ÓÇ¿¶È <25mM
4. ¸ßphÖµ >8.0
5. ÓлúÈܼÁ,ÈçÒÒ´¼£¬ÒÒ¶þ´¼µÈ
6. ÓÃÆäËûÑôÀë×Ó´úÌæMgÀë×Ó
±ÜÃâÐÇ»îÐԵķ½·¨ÏàÓ¦ÓУº¼õÉÙøµÄÓÃÁ¿£¬½µµÍ¸ÊÓÍŨ¶È£¬Ìá¸ßÀë×ÓÇ¿¶È£¬±£Ö¤·´ÕýÌåϵÖÐûÓÐÓлúÈܼÁ£¬½µµÍphÖµ£¬ÓÃMgÀë×Ó×ö¶þ¼ÛÑôÀë×Ó¡£
5.2 ²Ù×÷ºÍ±ê¼ÇºËËáµÄø£¨Á˽⣩
5.3 ºËËá·Ö×ÓÔÓ½»¼¼Êõ
¸ÅÄ¾ßÓл¥²¹ÐòÁеÄÁ½ÌõºËËáµ¥Á´ÔÚÒ»¶¨Ìõ¼þÏ£¬°´¼î»ùÅä¶ÔÔ­ÔòÐγÉË«Á´µÄ¹ý³Ì¡£
ºËËá·Ö×ÓÔÓ½»µÄ»ù±¾Ô­Àí: DNA±äÐԺ͸´ÐÔ»òÔÓ½»(hybridization)
Ó°ÏìÔÓ½»µÄÒòËØ
1£®ºËËá·Ö×ÓµÄŨ¶ÈºÍ³¤¶È£ºÅ¨¶È´ó£¬¸´ÐԿ죻·Ö×ÓÁ¿´ó£¬¸´ÐÔÂý
2£®Î¶È
3£®Àë×ÓÇ¿¶È
4£®ÔÓ½»ÒºÖеļ×õ£°·
5£®ºËËá·Ö×ӵĸ´ÔÓÐÔ
6£®·ÇÌØÒìÐÔÔÓ½»·´Ó¦   Ô¤ÔÓ½»£º·â±Õ·ÇÌØÒìÐÔÔÓ½»Î»µã£¬ÓÃöÙÓ㾫×ÓDNA
·Ö×ÓÔÓ½»µÄ»ù±¾·½·¨
1£® Southern Ó¡¼£·¨£ºDNA/DNAÔÓ½»£¬¼´½«DNAµçÓ¾¡¢×ªÓ¡µ½¹ÌÏàÖ§³ÖÎïÉÏ£¬ÓÃ̽Õë½øÐмì²âµÄ·½·¨¡£
2£® Northern Ó¡¼£·¨£º¼ì²âRNA£¨Ö÷ÒªÊÇmRNA£©µÄ·½·¨
3£®°ßµãÓ¡¼£ÔÓ½»£º½«RNA»òDNA±äÐÔºóÖ±½ÓµãÑùÓÚNCĤ»òÄáÁúĤÉÏ¡£Óŵ㣺¼òµ¥¡¢¿ìËÙ¡¢¿Éͬʱ¼ì²â¶à¸öÑùÆ·
4£® Ô­Î»ÔÓ½»£º½«±ê¼ÇµÄºËËá̽ÕëÓëϸ°û»ò×éÖ¯ÖеĺËËá½øÐÐÔÓ½»£¬³ÆÎªÔ­Î»ÔÓ½»¡£
5£® Western Ó¡¼£·¨£º¼ì²âµ°°×ÖÊ£¬¼´½«µçÓ¾·ÖÀëµÄ·Ç±ê¼Çµ°°×ÖÊ×ªÒÆµ½¹ÌÏàÔØÌåÉÏ£¬ÓÃÌØÒìµÄ¿¹ÑªÇå¶Ôµ°°×ÖʽøÐмø¶¨¼°¶¨Á¿µÄ·½·¨
6£®ÒºÏàÔÓ½»
 
Chapter6 ·Ö×Ó¿Ë¡
 
±¾ÕÂÓ¦ÕÆÎÕ
×÷ΪÊÜÌåϸ°ûµÄ´ó³¦¸Ë¾ú£»
¡ïÓÉÖÊÁ£ÑÜÉúµÄÔØÌ壻
ÓÉλÊɾúÌåÑÜÉúµÄÔØÌ壻
Õ³Á£ÔØÌ壻
µ¥Á´Ë¿×´ÊɾúÌåM13ÔØÌ壻
¡ïÍâÔ´DNAÓëÔØÌåÖØ×飻
¡ïÖØ×éDNAµ¼ÈëÊÜÌåϸ°û£»
¡ïÑôÐÔÖØ×éÌåµÄɸѡºÍ¼ø¶¨¡£ 
±¾ÕÂÉæ¼°µÄÖ÷Òª¸ÅÄî
»ùÒò¿Ë¡: ÀûÓÃÖØ×éDNA¼¼Êõ·ÖÀëÄ¿µÄ»ùÒò
¿Ë¡: ¶¯´Ê£ºÖ¸´Óµ¥Ò»×æÏȲúÉúͬһµÄDNA·Ö×ÓȺÌå»òϸ°ûȺÌåµÄ¹ý³Ì
Ãû´Ê£ºÖ¸´ÓÒ»¸ö¹²Í¬×æÏÈÎÞÐÔ·±Ö³ÏÂÀ´µÄһȺÒÅ´«ÉÏͬһµÄDNA·Ö×Ó¡¢Ï¸°û»ò¸öÌåËù×é³ÉµÄÌØÊâµÄÉúÃüȺÌå¡£
»ùÒòÎĿ⣺ÓÉ´óÁ¿º¬ÓÐÌØ¶¨»ùÒòµÄ²»Í¬DNAƬ¶ÎµÄ¿Ë¡Ëù¹¹³ÉµÄȺÌ壬·ÖΪ»ùÒò×éÎÄ¿âºÍcDNAÎÄ¿â
»ùÒòÎÄ¿âµÄ¹¹½¨£ºÈç¹û¹¹½¨»ùÒò×éÎĿ⣬Ê×ÏÈÌáÈ¡»ùÒò×éDNA£¬Ëæ»ú´ò¶Ï£¬´ò¶ÏµÄ·½·¨ÓÐÎïÀíºÍÉúÎï·½·¨£¬ÎïÀí·½·¨Êdz¬Éù²¨·ÛË飨Ö÷ҪʹÓõķ½·¨£©£¬ÉúÎï·½·¨ÊÇøÇУ¬È»ºóÓÃÕâЩƬ¶Î¹¹½¨ÖÊÁ££¬×ª»¯²¢±í´ïÓڴ󳦸˾ú£¬µÃµ½´óÁ¿µÄ¿Ë¡¡£ÔÙ½«µÃµ½µÄÐòÁнøÐвâÐò£¬²âÐòÍê³Éºó¾Í½¨³ÉÁË»ùÒòÎĿ⡣¶ÔÓÚÎÄ¿âÖеÄÿһ¸ö¿Ë¡ËüµÄÐòÁж¼ÊÇÒÑÖªµÄ¡£cDNAÎÄ¿âµÄ¹¹½¨»ù±¾ÏàËÆ£¬ÏÈÌáÈ¡mRNA£¬È»ºó·´×ªÂ¼µÃµ½cDNA£¬´ò¶Ï£¬×°ÈëÖÊÁ££¬´óÁ¿±í´ï£¬×îºó²âÐò¡£
ÔØÌ壺½«ÍâÔ´DNA»ò»ùÒòЯ´øÈëËÞÖ÷ϸ°û£¨host cell£©µÄ¹¤¾ß³ÆÎªÔØÌå
ÔØÌåÓ¦¾ß±¸ÒÔÏÂÌØµã£º
1. ÔÚËÞÖ÷ϸ°ûÄÚ±ØÐëÄܹ»×ÔÖ÷¸´ÖÆ£¨¾ß±¸¸´ÖÆÔ­µã£©£»
2. ±ØÐë¾ß±¸ºÏÊʵÄøÇÐλµã£¬¹©ÍâÔ´DNAƬ¶Î²åÈ룬ͬʱ²»Ó°ÏìÆä¸´ÖÆ£»
3.       ÓÐÒ»¶¨µÄÑ¡Ôñ±ê¼Ç£¬ÓÃÓÚɸÑ¡£»
4.       ÓÐÒ»¶¨µÄ¿½±´Êý£¬±ãÓÚÖÆ±¸¡£
5.       ¸½¼ÓÒòËØ£ºMSC£¬LacZ’£¨α-»¥²¹£©£¬ssDNA£¬ phage£¬origin£¬PromoterÒÔ¼°cosλµãµÈ¡£
ÔØÌåµÄÀàÐÍ ÖÊÁ££¨plasmid£©¡¢ÊɾúÌ壨phage£©¡¢Õ³Á£ÔØÌ壨cosmid£¬ÓֳƿÂ˹ÖÊÁ££©¡¢ÊɾúÁ££¨phagemid£©
µÚÒ»½Ú   ÖÊÁ£ÔØÌå
£¨Plasmid vectors£©
Ò»¡¢ÖÊÁ£µÄ»ù±¾ÌØÐÔ
1£®¸ÅÄî: ȾɫÌåÍâµÄÒÅ´«Òò×Ó£¬ÄܽøÐÐ×ÔÎÒ¸´ÖÆ(µ«ÒÀÀµÓÚËÞÖ÷±àÂëµÄøºÍµ°°×ÖÊ£©;´ó¶àÊýΪ˫Á´¡¢±ÕºÏ»·×³DNA·Ö×Ó£¬ÉÙÊýΪÏßÐÔ;´óС1kb¡«20kb£¬Ò²Óиü´óµÄ£¨200kb)
2£®ÖÊÁ£µÄ±íÐÍ£º¿¹¿¹¾úËØ¡¢¿¹ÖؽðÊô¡¢²úÉú¿¹¾úËØ¡¢²úÉú´ó³¦¸Ë¾úËØ¡¢²úÉúÈÜÑªËØ¡¢²úÉú³¦¶¾ËØ¡¢²úÉúÁò»¯Çâ¡¢½µ½â·¼Ïã×廯ºÏÎï¡¢ÓÕ·¢Ö²ÎïÖ×Áö¡¢ÌÇ·¢½Í¡¢²úÉúÏÞÖÆÃ¸ºÍÐÞÊÎø
3£®ÖÊÁ£µÄ¿½±´Êý£ºÑϽôÐÍ£º¿½±´ÊýÓÐÏÞ£¬´óÔ¼1¡«¼¸¸ö£»ËɳÚÐÍ£º¿½±´Êý½Ï¶à£¬¼¸Ê®ÖÁ¼¸°Ù
4£®ÖÊÁ£µÄ²»ÏàÈÝÐÔ£ºÁ½¸öÖÊÁ£ÔÚͬһËÞÖ÷Öв»Äܹ²´æµÄÏÖÏó¡£ÔÚµÚ¶þ¸öÖÊÁ£µ¼Èëºó£¬ÔÚ²»Éæ¼°DNAÏÞÖÆÏµÍ³Ê±£¬²»ÏàÈݵÄÖÊÁ£Ò»°ãΪÀûÓÃͬһ¸´ÖÆÏµÍ³£¬ÖÊÁ£·ÖÅäµ½×Óϸ°ûʱ»á·¢Éú¾ºÕù£¬Ëæ»úÌôÑ¡£¬Î¢Ð¡²îÒ죬×îÖÕ·Å´ó¡£
5£®×ªÒÆÐÔ£ºÔÚ×ÔÈ»Ìõ¼þÏ£¬ºÜ¶àÖÊÁ£¿ÉÒÔͨ¹ý³ÆÎªÏ¸¾ú½ÓºÏµÄ×÷ÓÃ×ªÒÆµ½ÐÂËÞÖ÷ÄÚ¡£¹©ÌåºÍÊÜÌåϸ°ûͨ¹ý¹©Ìåϸ°û±íÃæµÄÏËë½Ó´¥£¬È»ºóÒ»¸öÖÊÁ£¿½±´Í¨¹ý¸ÃÏËë½øÈëÊÜÌåϸ°û
FÖÊÁ££ºÓÖ½ÐFÒò×Ó£¬¼´ÖÂÓýÒò×Ó£¨fertility factor)µÄ¼ò³Æ£¬ÎªÏ¸¾úµÄÓÎÀë»ùÒò£¬ÔÚϸ¾úµÄ½áºÏÖÐʹϸ¾úÄܹ»ÆðÐÛÐÔµÄ×÷Óá£ÐÛÐÔϸ¾ú³äµ±Ò»¸öDNA¹©Ìå²¢²úÉúFÐÔÐ룬ͨ¹ýFÐÔÐëDNA±»×ªÒƵ½ÊÜÌåµÄ´ÆÐÔϸ°û¡£
¶þ¡¢±ê¼Ç»ùÒò £¨×öÒ»°ãÐÔÁ˽⣩
£¨1£©°±ÜÐÇàÃ¹ËØ¿¹ÐÔ»ùÒò£¨Ampampr ampicillin£©
ÇàÃ¹ËØÒÖÖÆÏ¸°û±ÚëľÛÌǵĺϳÉ£¬ÓëÓйصÄø½áºÏ£¬ÒÖÖÆ×ªëÄ·´Ó¦²¢ÒÖÖÆÆä»îÐÔ¡£
£¨2£©ËÄ»·ËØ¿¹ÐÔ»ùÒò£¨tet tetracycline£©
ÓëºËÌÇÌå30SÑÇ»ùµÄÒ»ÖÖµ°°×ÖʽáºÏ£¬´Ó¶øÒÖÖÆºËÌÇÌåµÄתλ
£¨3£©ÂÈÃ¹ËØ¿¹ÐÔ»ùÒò£¨chloramphenicol, Cmor Cat£©
CmÓëºËÌÇÌå50SÑÇ»ù½áºÏ²¢ÒÖÖÆµ°°×ÖʺϳÉ¡£
£¨4£©¿¨ÄÇÃ¹ËØºÍÐÂÃ¹ËØ¿¹ÐÔ»ùÒò£¨kanamycin£¯neomycin£©
¿ÉÓëºËÌÇÌå³É·ÖÏà½áºÏ²¢ÒÖÖÆµ°°×ÖʺϳɵÄÍÑÑõÁ´Ã¹°·µª»ùÌÇÜÕ
¡ï α-»¥²¹£¨αcomplementation£©p90. Lac Z»ùÒòÉÏȱʧ½ü²Ù×Ý»ùÒòÇø¶ÎµÄÍ»±äÌåÓë´øÓÐÍêÕûµÄ½ü²Ù×Ý»ùÒòÇø¶ÎµÄβ-°ëÈéÌÇÜÕøÒõÐÔµÄÍ»±äÌåÖ®¼äʵÏÖ»¥²¹¡£ÓÃ×öɸѡ±ê¼Ç
MCS£¨Multiple cloning sites£©¶à¿Ë¡λµã£ºÈ˹¤¹¹½¨µÄ£¬½ôÃÜÅÅÁеľßÓжàÖÖÏÞÖÆÃ¸Ê¶±ðÐòÁеÄÒ»¶ÎDNAÐòÁУ¬¿É·½±ãµÄÓÃÓÚÍâÔ´DNAƬ¶ÎµÄ²åÈë¡£
ÏÞÖÆÃ¸Æ×ɸѡ
1£® ×ª»¯ºóÌôÈ¡Ðí¶à¶ÀÁ¢µÄϸ¾ú¾úÂä
2£® ÉÙÁ¿ÅàÑø²¢ÌáÈ¡ÖÊÁ£
3£® ¸ù¾Ý¿Ë¡Ƭ¶ÎºÍ²åÈëÔØÌåµÄλµã£¬Ñ¡ÔñºÏÊʵÄÏÞÖÆÃ¸½øÐÐøÇÐ
4£® Äý½ºµçÓ¾·ÖÎöÏÞÖÆÃ¸Í¼Æ×£¬´Ó¶øÑ¡³öÑôÐÔ¿Ë¡
±í´ïɸѡ
1£® ¹¹½¨±í´ïÔØÌ壨º¬¸ßЧÆô¶¯×Ó£©
2£® ¼ø¶¨±í´ï²úÎï——µ°°×ÖʵķÖ×Ó´óС
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·ÖÃÚÐÍÔØÌåµÄÓŵã
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SangerË«ÍÑÑõÄ©¶ËÖÕÖ¹·¨£»PCR¼¼Êõ£»DNA×Ô¶¯²âÐòÒǵķ¢Õ¹£»ÉúÎïÐÅϢѧ·ÖÎöÈíÓ²¼þÉèÊ©
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Ö𲽿Ë¡·¨£¨Clone by Clone£©
»ùÒò×éDNA→BACÎÄ¿â→¸ù¾ÝÎïÀíͼÆ×ÕýÈ·¶¨Î»µÄBAC »òcontig→ÓÃÓÚö±µ¯·¨²âÐòµÄºòÑ¡¿Ë¡→ÓÃÓÚö±µ¯·¨²âÐòµÄÑǿˡ→²âÐò²¢×é×°→ÍêÕûµÄ»ùÒò×éÐòÁÐ
È«»ùÒò×éö±µ¯·¨£¨Whole Genome Shot-gun)ÓÖ½ÐÄñǹ·¨
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¡ñ ÔÚ²»Í¬ÎïÖÖ¼äËÑѰ¹¦ÄÜÏàͬµÄ»ùÒò(orthologs)¡£
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Chapter 8¾ÛºÏøÁ´Ê½·´Ó¦(PCR)
 
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Chapter 9 DNA·Ö×Ó±ê¼Ç¼¼Êõ
 
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DNA ·Ö×Ó±ê¼Ç£º DNA ±ê¼ÇÊÇDNA ˮƽÉÏÒÅ´«±äÒìµÄÖ±½Ó·´Ó³,×îÄÜÎȶ¨ÒÅ´«ÇÒÐÅÏ¢Á¿´ó,Ðí¶à¶à̬ÐÔ±ê¼ÇÔڷDZàÂëÇø±íÏÖÑ¡Ôñ“ÖÐÐÔ”,²»ÊÜÄÚÍâ»·¾³Ó°Ïì,Óë»ùÒò±í´ïÓë·ñÎÞ¹Ø,¼ì²âѸËÙ,²Ù×÷Ò²·½±ã¡£Óɴ˿ɼû,DNA ·Ö×Ó±ê¼ÇÊÇ×îÀíÏëµÄÒÅ´«±ê¼Ç¡£
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̽ÕëµÄÀ´Ô´Ö÷ÒªÊÇcDNA ¿Ë¡,ÆäÖÐcDNA̽Õë±£ÊØÐÔ½ÏÇ¿,Ðí¶àͬ¿ÆÎïÖÖcDNA ̽Õë¶¼¿ÉÒÔ×÷ΪͨÓÃ̽Õë.
RFLP ·ÖÎö¼¼Êõ·Ïß
С·Ö×ÓDNA ,Èçϸ°ûÆ÷»ùÒò,½«´¿»¯µÄDNA ÑùÆ·ÓÃÏÞÖÆÐÔÄÚÇÐøÏû»¯³É³¤¶È²»µÈµÄƬ¶Î½øÐÐÇíÖ¬ÌÇÄý½ºµçÓ¾·ÖÀë,¾­ä廯ÒÒ¶§È¾É«ºóÔÚ×ÏÍâ¹âÏÂÖ±½Ó¹Û²ìÆä¶à̬ÐÔ¡£
´ó·Ö×ÓºËDNA ÐèÒª½èÖú·Ö×ÓÔÓ½»ÊÖ¶Î,ÓÃijһ±ê¼ÇDNA Ƭ¶ÎµÄ̽ÕëÓë±»×ªÒÆµ½ÏõËáÏËά±¡Ä¤ÉϵÄDNA Ƭ¶Î½øÐÐÔÓ½»,Ö»ÓÐÓë̽ÕëÓи߶ÈͬԴÐÔµÄÆ¬¶Î±»¼ì²â³öÀ´¡£
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RFLP ÐèÒª´óÁ¿µÄDNA ,ÑùÆ·ÒªÇó¸ß¡£¶à̬ÐÔÆµÂʽϵÍ¡£ÅжÁÓÐÒ»¶¨À§ÄÑ¡£ÊµÑéÊÒÖ®¼ä½á¹û±È½ÏÓÐÒ»¶¨À§ÄÑ¡£ÖƱ¸·ÅÉäÐÔ̽Õë½øÐÐSouthern ÔÓ½»,Òò¶ø±È½Ï·Ñʱ,¶ÔÈËÌ彡¿µÓÐÓ°Ïì,¶Ô»·¾³ÓÐÎÛȾ
RFLPÓ¦ÓÃ
ÊÊÓÃÓÚ¹¹½¨±í´ïͼÆ×¡£·ÖÎöȺÌåÄÚºÍȺÌå¼äÒÅ´«±äÒì¶È¡£ÈºÌå¼ä»ùÒòÁ÷ÆÀ¼ÛºÍÇ×Ôµ¹ØÏµÊ±ÊÇÇ¿ÓÐÀûµÄÆÀ¼Û¡£Ò²¿ÉÓÃÓÚÈËÀàÒÅ´«¼²²¡µÄÕï¶Ï¡£
Ëæ»úÀ©ÔöƬ¶Î³¤¶È¶à̬ÐÔ±ê¼Ç(Random Amplified Polymorphic DNA ,RAPD)
1990 ÄêÓÉÃÀ¹ú¶Å°î¹«Ë¾Å©²úÆ·Ñо¿ÖÐÐĵÄWilliams µÈÓÃÈÎÒâ˳ÐòµÄ10 ¸ö¼î»ùµÄ¹ÑºËÜÕËáÆ¬¶Ï×÷ΪÒýÎï,ÓÃδ֪ÐòÁеĻùÒò×éDNA Ϊģ°å,ͨ¹ýPCR À©Ôö»ñµÃÒ»×é²»Á¬ÐøµÄDNA Ƭ¶Î£¬¾­ÇíÖ¬ÌÇÄý½ºµçÓ¾À´¼ì²âDNA ÐòÁжà̬ÐÔ.²¢½«´Ë·¨ÃüÃûΪRAPD¡£
RAPD ¼¼ÊõÓëPCR ¼¼ÊõÏà±È½Ï
1£® RAPD ·´Ó¦Ò»°ãÓÉ1 ¸ö10¹ÑºËÜÕËáËæ»úÒýÎï,³£¹æPCR ÐèÓÃ2 ¸ö20 bp ×óÓÒµÄÌØ¶¨Éè¼ÆÒýÎï;
2£® RAPD ·´Ó¦ÍË»ðζȵÍ,Ò»°ãÊÇ36 ¡æ×óÓÒ,Ò»·½Ãæ±£Ö¤ÒýÎïÓëÄ£°åDNA µÄÎȶ¨Åä¶Ô,ͬʱÔÊÐíÊʵ±´íÎóÅä¶Ô,Ìá¸ß¶à̬ÐÔ¼ì³öÂÊ;
3£® ³£¹æPCR ÎªÌØÒìÀ©Ôö,¶øRAPD ²úÎïÎªËæ»úÀ©Ôö.
RAPD ¼¼Êõ·Ïß
²ÉÓÃËæ»úÐòÁÐ10¸öºËÜÕËáÒýÎï¶Ô»ùÒò×é½øÐÐPCR À©Ôö,·ÇÌØÒìÒýÎï¿É½áºÏÄ£°åDNA µÄ¶à¸öλµã,²úÉú¶à¸öÌõ´ø,¾­µçÓ¾·ÖÀë,»òEB Ⱦɫ,¿ÉÖ±½Ó¼ì²âDNA¶à̬ÐÔ,²¢ÓÃÓÚDNA Ö¸ÎÆ·ÖÎö.
RAPD µÄÓŵã
1£®ÒýÎïÉè¼ÆÊÇËæ»úµÄ, ¹Ê¿ÉÔÚ¶Ô¸÷ÖÖÉúÎïûÓÐÈκηÖ×ÓÉúÎïѧÑо¿µÄÇé¿öÏÂ,¶ÔÆä½øÐÐDNA ¶à̬ÐÔ·ÖÎö¡£
2£®ËùÐèÄ£°åDNA µÄÁ¿¼«ÉÙ, Ö»ÒªÓÐÌØ¶¨µÄDNA Ƭ¶Î, ¾Í¿É½«¸ÃDNA Ƭ¶ÎÀ©Ôö¡£
3£®ÒýÎïΪÈ˹¤ºÏ³É, ͨ³£Ò»Ì×ÒýÎï¿ÉÓÃÓÚ¶àÎïÖֵĻùÒò×éDNA ¶à̬ÐÔ·ÖÎö¡£
4£®Ã¿¸öRA PD ±ê¼Ç¾ÍÏ൱ÓÚÒ»¸ö°ÐÐòÁÐλµã(Sequence Tagged Sites) , ¿ÉÒÔ¼ì²â³öRFLP±ê¼Ç²»Äܼì²âµÄÖØ¸´Ë³Ðò,¿ÉÌî²¹RFL PͼÆ×¿Õȱ, ¸üÓÐЧµØ½øÐÐÒÅ´«Í¼Æ×µÄ¹¹½¨¡£
5£®¾ø´ó¶àÊýRA PD±ê¼Ç×ñ´ÓÃϵ¶ûÒÅ´«¹æÂÉ¡£
RAPD ¼¼ÊõµÄ¾ÖÏÞÐÔ
1£®ÓÉÓÚËæ»úÒýÎï½Ï¶Ì,ÍË»ðζȵÍ,Òò¶ø¶ÔһЩPCR ÒòËØ¸üÃô¸Ð,ÖØ¸´ÐԽϲî¡£Ò»°ãÀ´Ëµ,¶ÔÓÚÌØ¶¨µÄÒÇÆ÷É豸,¶ÔÆä·´Ó¦Ìõ¼þ·´¸´½øÐÐÓÅ»¯,²Å¿ÉÒԵõ½½Ï¿É¿¿µÄ½á¹û¡£
2£®·Ö±æÂʵÍ¡£
3£®½á¹û²»È«Êǹ²ÏÔÐÔ¡£
4£®ÎÞ·¨·ÖÎö²îÒìÔ­Òò¡£
Ó¦ÓÃ
1£®¾¡¹ÜRAPD ¼¼Êõµ®ÉúµÄʱ¼äºÜ¶Ì,µ«ÓÉÓÚÆä¶Àµ½µÄ¿ìËÙ¡¢¼ò±ãµÄ¼ì²âDNA ¶à̬ÐԵķ½Ê½,ʹÕâЩ¼¼ÊõÒÑÉøÍ¸ÓÚ»ùÒò×éÑо¿µÄ¸÷¸ö·½Ãæ,ÔÚ·Ö×ÓÉúÎïѧµÄ¸÷¸öÁìÓòµÄÑо¿ÖоßÓй㷺µÄÓ¦ÓÃǰ¾°¡£
2£®ÊÊÓÃÓÚÖÖÖÊ×ÊÔ´µÄ¼ø¶¨ºÍ·ÖÀࡢĿ±êÐÔ×´»ùÒò·Ö×Ó±ê¼Ç¡¢ÒÅ´«Í¼Æ×µÄ¿ìËÙ¹¹½¨µÈÑо¿,Ò²¿ÉÓÃÓÚÇ×Ôµ¹ØÏµµÈµÄÑо¿
À©ÔöƬ¶Î³¤¶È¶à̬ÐÔ(Amplified Fragment Length Polymorphism ,AFLP)
¼ÈÓÐRFLP µÄ¿É¿¿ÐÔ,ÓÖÓÐRAPD µÄ·½±ãÐÔ
»ù±¾Ô­Àí
ÔÚAFL P ÖÐ,Èç¹ûDNA Ƭ¶ÎÒÅ´«ÌØÐÔ·¢Éú¸Ä±ä,ÔòøÇÐÆ¬¶ÎÊýÄ¿¡¢³¤¶Ì·¢Éú±ä»¯,ͨ¹ýPCR À©Ôö»ùÒò×éDNA Ƭ¶Î,À©Ôö²úÎï¶à̬ÐԾͷ´Ó³ÔÚ±äÐÔ¾Û±ûÏ©õ£°·µçÓ¾µÄͼÆ×ÉÏ
ÆäÖÐÒýÎï= ½ÓÍ·+ øÇÐλµã+ 2¡«3 ¸öºËÜÕËá.
AFLP ¼¼Êõ·ÖÎöÁ÷³Ì
1£®DNA Ä£°åÖÆ±¸¡£
2£®ÌáÈ¡Ñù±¾DNA ¾­Å¨¶ÈºÍÖÊÁ¿¼ì²âºó,Ò»°ã²ÉÓÃ˫øÇÐ, ÔÚ»ùÒò×éDNA ÉϲúÉúµÍƵºÍ¸ßƵÇпÚ¡£
3£®Ñ¡ÔñÐÔÀ©ÔöøÇÐÆ¬¶Î. øÇкó,ÏÞÖÆÐÔÆ¬¶ÎÔÚT4 Á¬½Óø×÷ÓÃÏÂÓëÌØ¶¨½ÓÍ·Á¬½Ó,ÐγɴøÓнÓÍ·µÄÌØÒìÐÔÆ¬¶Î¡£
4£®PCR ǰÀ©Ôö,Ò»°ãÓôøÒ»¸öÑ¡ÔñÐÔÒýÎï½øÐÐÔ¤À©Ôö·´Ó¦Ìõ¼þÓë³£¹æPCR·´Ó¦»ù±¾Ò»ÖÂ;
5£®ÀûÓ÷ÅÉäÐÔÍ¬Î»ËØ±ê¼Ç»òÓ«¹â±ê¼ÇPCR ÒýÎï¡£ÔÚTaq¾ÛºÏø×÷ÓÃÏÂÍê³É94¡æ±äÐÔ30 s ,65¡æ´ã»ð30 s ,72 ¡æÑÓÉì60 s ,PCR À©Ôö36 ¸öÑ­»·¡£
6£®PCR²úÎïÔÚº¬ÄòËØ¾Û±ûÏ©õ£°·ÉϵçÓ¾¡£
7£®½«µçÓ¾ºóµÄÄý½º×ªÒƵ½Îü¸½ÂËÖ½ÉÏ,¾­¸É½ºÒǽøÐиɽº´¦Àí¡£
8£®ÔÚX ¹âƬÉϸйâ,ÊýÈÕºó³åÏ´½ºÆ¬²¢½øÐнá¹û·ÖÎö¡£
Óŵã
ËùÐèDNA ÉÙ(½öÐè0. 5 ΢¿Ë) ,Ò²¿ÉÒÔ×÷ÓÃÓÚÏßÁ£ÌåDNA¡£´ÓÏßÁ£ÌåÖеõ½RFL PÑо¿ËùÐèµÄ¼¸Ê®µ½ÉϰÙ΢¿ËmDNA ÊǺÜÀ§ÄѵÄ¡£Rosendahl ºÍTaylor ³É¹¦µØ´Ómycorrhizal ¾úµ¥æß×ÓÖлñµÃÁËAFL P ±ê¼Ç,¶øÃ¿¸öµ¥æß×Ó½ö²úÉúÔ¼0. 1¡«0. 5μgDNA£»Ð§ÂʸßÇÒ¼òµ¥,RFLP ÿ´ÎÖ»ÄÜ·ÖÎöÒÑÖªÉÙÊý¼¸¸öλµã,¶øAFL P³ÊµäÐ͵ÄÃϵ¶ûʽÒÅ´«,ÿ¸öAFL P ¿ÉÒÔ»ñµÃ50¡«100 ÌõÆ×´øÐÅÏ¢,¶à̬ÐÔÇ¿£»·Ö±æÂʸß¡£AFL PÀ©ÔöƬ¶Î¶Ì,Ƭ¶Î¶à̬ÐÔ¼ì³öÂʸß,¶øRFL P Ƭ¶ÎÏà¶Ô½Ï´ó,ÄÚ²¿¶à̬ÐÔÍùÍù±»Ñڸǣ»¿É¿¿ÐԺá£AFL P ÓÉÓÚÊÇÌØ¶¨ÒýÎïÀ©Ôö,ÍË»ðÎÂ¶È¸ß (Ò»°ã65 ¡æ) ,Ö»ÓÐÄÇЩÓë3’¶ËÑϸñÅä¶ÔµÄƬ¶Î²ÅÄܵõ½À©Ôö,Ñ¡ÔñÐÔºÜÇ¿.Òò¶ø¼ÙÑôÐÔµÍ,ÖØ¸´ÐÔºÃ,¿Ë·þÁËRAPD ȱµã¡£Jones µÈÔÚÅ·ÖÞ8 ¸öʵÑéÊÒ,ʹÓù²Í¬µÄÑù±¾,½øÐÐÁËÑϸñµÄʵÑé,½«µÃµ½µÄDNA ͼÆ×±È½Ï,172 ÌõÆ×´øÖнöÒ»Ìõ³ö´í¡£Õâ¾ÍÊÇ˵,ʵÑéÊÒ¼äµÄÎó²îÒªÉÙÓÚ6 %£»²»ÐèÒªSouthern ÔÓ½»,²»ÐèÒªÔ¤ÏÈÖªµÀDNA µÄÐòÁÐÐÅÏ¢¡£¶øÇÒ,ÒѾ­·¢ÏÖÔÚËùÓеĶà̬AFLP ±ê¼ÇÖÐ, ¹²ÏÔÐÔµÄAFLP ±ê¼Ç³öÏÖÆµÂÊΪ4 %¡«15 %,¼´200 ¸ö¶à̬±ê¼Ç°üÀ¨5¡«30 ¸ö»ùÒò×ùλ£»Àî´«ÓѵÈ(2000) ½«AFLP ±ê¼ÇºÍRFLP ,RAPD ±ê¼Ç½øÐбȽÏ,ÈÏΪËüÃǼø±ð¶à̬µÄ¹¦Ð§ÊÇAFLP > RAPD > RFLP¡£
AFLPµÄÓ¦ÓÃ
1£®ÔÚÉúÎï¶àÑùÐÔÖн«AFLP¹ã·ºÓ¦Óõ½ÄÇЩÎÞ·¨Í¨¹ýÐÎÌ¬ÌØÕ÷Çø±ðµÄ·Ö×Ó±ê¼Ç½â¾öµÄ¼Òϵ»ò½üÔµÎïÖÖÓëϵͳ·¢Éú¹ØÏµÑо¿ÖÐ,ÊÇÉúÎï¶àÑùÐÔµ÷²éµÄÖØÒª¹¤¾ß¡£
2£®¹¹½¨ÒÅ´«Í¼Æ×¡£
3£®AFLP»¹¿ÉÓ¦ÓÃÓÚ»ùÒò¶¨Î»ºÍÐÔ±ð¼ø¶¨¼°·±Ö³ÐÐΪÑо¿ÖС£
AFLPµÄ²»×ã
1£®²»Êǹ²ÏÔÐÔ±ê¼Ç,À©ÔöƬ¶ÎÉÙÊýÊǹ²ÏÔÐÔÌõ´ø,¶àÊýÊÇÀ©ÔöƬ¶ÎÓÐ/ ÎÞÏÔÐÔÌõ´ø,Ìõ´øÍ³¼Æ·ÖÎöÄѶȽϴó¡£
2£®±ê¼ÇÒýÎïÐèÒªÍ¬Î»ËØ»òÆäËü»¯Ñ§ÊÔ¼Á,Ïà¶Ô·Ñʱ¡£
3£®¶Ô²Ù×÷ÈËÔ±µÄʵÑé¼¼ÊõˮƽҪÇó½Ï¸ß¡£
4£®¶ÔÄ£°åDNAµÄÖÊÁ¿ÒªÇó½Ï¸ß,ÇÒÐèÄ£°åDNAÁ¿¶àÓÚ2μg ¡£
΢ÎÀÐÇ(Microsatellite) £ºÒÔ¼¸¸ö(1¡«6 bp)ºËÜÕËáΪµ¥Î»,¶à´Î´®ÁªÖظ´ÐòÁÐ,Ò²³ÆÖ®Îª¼òµ¥Öظ´ÐòÁÐ(single sequence repeats ,SSR) ¡¢¶Ì´®ÁªÖظ´ÐòÁÐ(short tandem repeats ,STR) »ò¼òµ¥ÐòÁг¤¶È¶à̬ÐÔ(single sequence length polymorphism ,SSLP) ¡£
СÎÀÐÇDNA£º ÊÇÒ»Ð©ÖØ¸´µ¥Î»ÔÚ11 - 60bp ,ÖØ¸´´ÎÊýÔڳɰÙÒÔÉÏ,×ܳ¤¶ÈÓɼ¸°ÙÖÁ¼¸Ç§¸ö¼î»ù×é³ÉµÄ´®ÁªÖظ´ÐòÁÐ,Ö÷Òª·Ö²¼ÓÚȾɫÌå½ü¶ËÁ£ÇøºÍ×ÅË¿Á£Çø
¸ù¾Ý΢ÎÀÐÇ×ÔÉí½á¹¹ÓÖ½«Î¢ÎÀÐÇ·ÖΪÍêÈ«¡¢²»ÍêÈ«¡¢¸´ºÏ΢ÎÀÐÇ¡£Íêȫ΢ÎÀÐÇÓɲ»ÖжϵÄÖØ¸´µ¥Î»´®Áª¶ø³É,²»Íêȫ΢ÎÀÐÇÊÇÖ¸ÖØ¸´µ¥Î»¼äÓÐ3 ¸öÒÔϵķÇÖØ¸´¼î»ù¼ä¸ô,ÇÒÁ½¼ä¸ô¼äÖØ¸´µ¥Î»Á¬ÐøÖظ´Êý²»µÍÓÚ3 ,¸´ºÏ΢ÎÀÐÇÓɼ¸Àà´®ÁªÖظ´µ¥Î»¹¹³É,ÖмäÓÐ3 ¸öÒÔϼî»ù¼ä¸ô,ÇÒÁ½¼ä¸ô¼äÖØ¸´µ¥Î»Á¬ÐøÖظ´Êý²»µÍÓÚ5¡£
Ô­Àí
Ñо¿·¢ÏÖ΢ÎÀÐÇÓɲàÒíÐòÁн«ºËÐÄÐòÁÐÌØÒìµØ¶¨Î»ÓÚȾɫÌå,¸Ã²àÒíÐòÁÐÔÚÎïÖÖ¼ä¾ßÓнϸßͬԴÐÔ,Òò´Ë,¿ÉÒÔ¸ù¾Ý΢ÎÀÐÇÁ½¶ËµÄ²àÒíÐòÁÐÉè¼ÆÒýÎï,½øÐÐPCR À©ÔöÒÔ»ñµÃ΢ÎÀÐÇDNA Ö¸ÎÆÍ¼Æ×¡£ÓÉÓÚ΢ÎÀÐǺËÐÄÐòÁзֲ¼Óڽṹ»ùÒò²àÒí»òÄÚº¬×ÓÖÐ,Òò´Ë,Ëü³ÐÊܵÄÑ¡ÔñѹÁ¦½ÏС,ÔÚÎïÖÖ½ø»¯¹ý³ÌÖлýÀÛÁ˷ḻµÄ±äÒì,´Ó¶ø¾ö¶¨ÁË΢ÎÀÐǵĶà̬ÐԽϸß,Æä¶à̬ÐÅÏ¢º¬Á¿(PIC) ÖµÔÚ0. 7 ÒÔÉÏ,¼ÓÉϸü¼ÊõÎȶ¨¿É¿¿,²Ù×÷³ÌÐòÏà¶Ô¼ò»¯,Òò´Ë±»ÈÏΪÊÇÒ»ÖÖºÜÓÐÓ¦ÓüÛÖµµÄÒÅ´«±ê¼Ç¼¼Êõ¡£
SSR ·Ö×Ó±ê¼ÇÒ»°ã³ÌÐò
1£®Î¢ÎÀÐÇÐòÁеĻñµÃ:°üÀ¨¹¹½¨»ùÒò×éÎÄ¿â,¸ù¾ÝÓûµÃµ½µÄSSR ÀàÐÍ,Éè¼ÆºÏ³É¹ÑºËÜÕËá̽Õë,ͨ¹ý¾úÂäԭλÔÓ½»É¸Ñ¡ËùÐèµÄÖØ×é¿Ë¡,¶ÔÑôÐÔ¿Ë¡½øÐÐ˳Ðò¼ø¶¨.
2£®Î¢ÎÀÐÇÒýÎïÉè¼Æ:ÓÉÓÚ΢ÎÀÐÇÁ½²àÐòÁо߸߶ÈרһÐÔ,Òò´Ë¾Ý´ËÉè¼ÆÒýÎïÓÃÒÔÀ©ÔöͬһÎïÖÖÉõÖÁ²»Í¬ÎïÖֵįäËü»ùÒòÐÍÆ¬¶Î. ΢ÎÀÐÇÒýÎïÔÚ»ùÒò×éÖоßÓи߶ÈרһÐÔ,ÿһÌõÒýÎﳤ18¡«24 bp , ( G+ C) °Ù·Öº¬Á¿½Ó½ü50 %( Tm60 ¡æ×óÓÒ) .
3£®PCR À©Ôö:ÒÔ´ýÑо¿µÄºËDNA Ϊģ°å,ÓúϳÉÒýÎï½øÐÐPCR À©Ôö. À©ÔöʱÐè²ôÈëÍ¬Î»ËØ»òÆäËü·ÅÉäÐÔ±ê¼Ç,ÒÔ±ã¶ÔÀ©Ôö²úÎï½øÐзÖÎö.
4£®¶ÔÀ©Ôö²úÎï½øÐмì²â:À©Ôö²úÎï¾­±äÐÔ¾Û±ûÏ©õ£°·Äý½ºµçÓ¾,Äý½º¸ÉÔïºóͨ¹ý·ÅÉäÐÔ×ÔÏÔÓ°ÏÔʾ½á¹û,¸ù¾Ý½ºÆ¬ÉϵÄÌõ´ø·Ö²¼,·ÖÎöÑù±¾¶àÑùÐÔ. µ«ÓÉÓÚÍ¬Î»ËØÓÐΣÏÕÐÔ,¿ÉÓÃÒøÈ¾À´¼ì²âÀ©Ôö²úÎï,²»»á½µµÍÁéÃô¶È(ºÎƽ,1958)
Óŵã
1£®STRΪ¹²ÏÔÐÔÒÅ´«
2£®ÓзḻµÄ¶à̬ÐÔ,¾ø´ó¶àÊý²»ÊÜÑ¡ÔñѹÁ¦µÄÓ°Ïì
3£®½Ï¾ùÔȵطֲ¼ÈËÀàÈ«»ùÒò×é
4£®¿É¾­PCR À©Ôö 
Ó¦ÓÃ
1£®ÓÃÓÚ¹¹½¨ÒÅ´«Í¼Æ×¡£ÕâÊÇ΢ÎÀÐDZê¼ÇµÄÒ»¸öÖ÷ÒªÓÃ;¡£ÁíÍâ,΢ÎÀÐDZê¼Ç»¹¿ÉÓÃÓÚ»ùÒò¶¨Î»¡¢Ç×Ôµ¹ØÏµ¼°·±Ö³³É¹¦¶ÈÑо¿µÈ¡£
2£®ÓÃÓÚÒÅ´«¼²²¡Õï¶Ï: Õý³£¸öÌå΢ÎÀÐÇ×ùλÉ϶¼ÓÐÒ»¸öÑϸñÉÏÏÞ. ÓÉÓÚһЩδ֪»úÀí,ijЩ¸öÌå΢ÎÀÐÇÖØ¸´µ¥Î»µÄÖØ¸´´ÎÊý³¬¹ýÕâÒ»ÉÏÏÞ,´Ó¶ø´¦ÓÚÒ»ÖÖǰͻ±ä״̬,¶øËüÃǵĺó´úÖØ¸´´ÎÊýÈ´»á¼±¾çÔö¼Ó,¿É´ï¼¸Ç§¸ö¿½±´ÒÔÉÏ¡£
3£®ÓÃÓÚ»ùÒò¶¨Î»»ò²éÕÒºòѡĿµÄ»ùÒò¡£½«STR ×÷Ϊ»ùÒò×÷ͼµÄ±êÖ¾,¾Í¿ÉÓÃSTR ±êʶÈËÀàµÄÈ«»ùÒò×é,Ãè»æ»ùÒòͼ¡£Í¨¹ý¼ÒϵºÍ/ »ò¶ÔÕÕÑо¿,ÔËÓÃÁ¬ËøºÍÏà¹Ø·ÖÎö,ÎÒÃÇ¿ÉÒÔÕÒµ½Óë¼²²¡¸ß¶ÈÏà¹ØµÄSTR λµã,¼Ù¶¨²»Í¬µÄSTR µÈλ»ùÒòÓëÄ¿µÄ»ùÒòÁ¬Ëø,ÓÉÓÚÁ¬ËøµÄ»ùÒòλÖñض¨ÔÚͬһȾɫÌåÉÏÇÒλÖÃÓë´ËSTRµÈλ»ùÒòÁÚ½ü,ÀûÓÃÓë¼²²¡¸ß¶ÈÏà¹ØµÄSTRµÄλµãµÄ֪ʶ,¶ÔÆä¸½½üÇøÓò½øÐпË¡²âÐò,¾ÍÓпÉÄÜ·¢ÏÖÄ¿µÄ»ùÒò¡£ÔÚÈËÀà»ùÒò×é×÷ͼ·½Ãæ, STR µÄ³öÏÖ²»µ«Ê¹ÒÅ´«Í¼µÄ¾«¶ÈµÃµ½½øÒ»²½µÄÌá¸ß,ͬʱҲ³ÉΪÎïÀíͼÉϵıê¼Ç,´Ó¶ø´Ù½øÒÅ´«Í¼ÓëÎïÀíͼµÄÈÚºÏ
STR - PCR ¸´ºÏÀ©Ôö¼¼Êõ
ΪÁËÌá¸ßSTR ϵͳµÄ¸öÈ˼ø±ð»úÂÊ, ´ïµ½Í¬Ò»È϶¨µÄ½á¹û, ÈËÃÇ¿ªÊ¼Ñо¿¶à¸öSTR λµãµÄ¸´ºÏÀ©Ôö²¢»ñµÃ³É¹¦¡£¸´ºÏÀ©ÔöµÄ·½·¨Êǽ«¶à¸öÒýÎï¼ÓÈëͬһ·´Ó¦ÌåϵÖС£¹Ì¶¨dNRP¡¢Mg + + ÒÔ¼°±äÐÔζȺÍÑ­»·´ÎÊý, µ÷½Ú¸÷ÒýÎïŨ¶È½øÐÐͬ²½À©Ôö¡£Ä¿Ç°ÒÑÓÐ13 ¸öSTR λµãµÄ¸´ºÏÀ©Ôö¡£
µ¥ºËÜÕËá¶à̬ÐÔ(Single Nucleotide Polymorphism , SNP )£ºÖ¸»ùÒò×éÄÚDNA ÖÐÄ³Ò»ÌØ¶¨ºËÜÕËáÔÚλÖÃÉÏ´æÔÚÖû»¡¢²åÈ롢ȱʧµÈ±ä»¯,¶øÇÒÆäÖÐ×îÉÙÓÐÒ»ÖÖµÈλ»ùÒòÔÚȺÌåÖÐÍ»±äƵÂʲ»Ð¡ÓÚ1 %¡£SNP Ò»°ãÒÔÌæ»»ÎªÖ÷,µß»»Óëת»»Ö®±ÈΪ1 :2 ¡£
ת»»£¨transition£©£ºàÑßÊ´úÌæàÑßÊ£¬»òà×ऴúÌæà×ड£
µß»»£¨transversion£©£ºàÑßʱ»à×à¤ËùÌæ´ú»òà×ऱ»àÑßÊËùÌæ´ú¡£
ĿǰÈËÀà»ùÒò×éÑо¿ÖÐSNP µÄÑо¿×îΪ¹ã·º¡£³ý´Ë,ÔÚ¹ûÓ¬¡¢¼¦¡¢È®Àà¡¢Öí¡¢ÃàÑò¡¢Å£µÈ¶¯ÎïÉÏÒ²¿ªÕ¹ÁËSNP Ñо¿¡£ÔÚÖ²ÎïÖÐÕ¹¿ªSNP ¹ã·ºÑо¿µÄÖÖÀàÔò½ÏÉÙ,½ü3 Äê½öÔÚÓñÃס¢´óÂó¡¢Ð¡Âó¡¢·¬ÇÑ¡¢Ë®µ¾µÈÅ©×÷ÎïÉÏ¿ªÕ¹ÁË´ËÏ×÷¡£
ÔÚ»ùÒò×éDNAÖУ¬Èκμî»ù¾ùÓпÉÄÜ·¢Éú±äÒ죬Òò´ËSNP¼ÈÓпÉÄÜÔÚ»ùÒòÐòÁÐÄÚ£¬Ò²ÓпÉÄÜÔÚ»ùÒòÒÔÍâµÄ·Ç±àÂëÐòÁÐÉÏ¡£×ܵÄÀ´Ëµ£¬Î»ÓÚ±àÂëÇøÄÚµÄSNP(cSNP)±È½ÏÉÙ£¬µ«ËüÔÚÒÅ´«ÐÔ¼²²¡Ñо¿ÖÐÈ´¾ßÓÐÖØÒªÒâÒ壬Òò´ËcSNPµÄÑо¿¸üÊܹØ×¢¡£
´Ó¶ÔÉúÎïµÄÒÅ´«ÐÔ×´µÄÓ°ÏìÉÏÀ´¿´£¬cSNPÓÖ¿É·ÖΪ2ÖÖ£º
Ò»ÖÖÊÇͬÒåcSNP(synonymous cSNP),¼´SNPËùÖµıàÂëÐòÁеĸı䲢²»Ó°ÏìÆäËù·­ÒëµÄµ°°×Öʵݱ»ùËáÐòÁУ¬Í»±ä¼î»ùÓëδͻ±ä¼î»ùµÄº¬ÒåÏàͬ£»ÁíÒ»ÖÖÊÇ·ÇͬÒåcSNP(non-synonymous cSNP),Ö¸¼î»ùÐòÁеĸıä¿ÉʹÒÔÆäΪÀ¶±¾·­ÒëµÄµ°°×ÖÊÐòÁз¢Éú¸Ä±ä£¬´Ó¶øÓ°ÏìÁ˵°°×ÖʵŦÄÜ£¬ÕâÖָı䳣Êǵ¼ÖÂÉúÎïÐÔ×´¸Ä±äµÄÖ±½ÓÔ­Òò¡£cSNPÖÐÔ¼ÓÐÒ»°ëΪ·ÇͬÒåcSNP¡£
Óŵã
1£®SNPÔÚÈËȺÖÐÊǶþµÈλ»ùÒòÐԵģ¬ÔÚÈκÎÈËȺÖÐÆäµÈλ»ùÒòƵÂʶ¼¿É¹À¼Æ³öÀ´¡£
2£®ËüÔÚ»ùÒò×éÖеķֲ¼½Ï΢ÎÀÐDZê¼Ç¹ã·ºµÃ¶à¡£
3£®Óë´®ÁªÖظ´µÄ΢ÎÀÐÇλµãÏà±È£¬SNPÊǸ߶ÈÎȶ¨µÄ£¬ÓÈÆäÊÇ´¦ÓÚ±àÂëÇøµÄSNP(cSNP),¶øÇ°ÕߵĸßÍ»±äÂÊÈÝÒ×ÒýÆð¶ÔÈËȺµÄÒÅ´«·ÖÎö³öÏÖÀ§ÄÑ¡£
4£®²¿·ÖλÓÚ»ùÒòÄÚ²¿µÄSNP¿ÉÄÜ»áÖ±½ÓÓ°Ïì²úÎïµ°°×ÖʵĽṹ»ò»ùÒò±í´ïˮƽ£¬Òò´Ë£¬ËüÃDZ¾Éí¿ÉÄܾÍÊǼ²²¡ÒÅ´«»úÖÆµÄºòÑ¡¸Ä±äλµã¡£
5£®Ò×ÓÚ½øÐÐ×Ô¶¯»¯¡¢¹æÄ£»¯·ÖÎö£¬Ëõ¶ÌÁËÑо¿Ê±¼ä¡£ÓÉÓÚSNPµÄ¶þ̬ÐÔ£¬·Ç´Ë¼´±Ë£¬ÔÚ»ùÒò×éɸѡÖÐSNPsÍùÍùÖ»Ðè+/-µÄ·ÖÎö£¬¶ø²»Ó÷ÖÎöƬ¶ÎµÄ³¤¶È£¬Õâ¾ÍÀûÓÚ·¢Õ¹×Ô¶¯»¯¼¼Êõɸѡ»ò¼ì²âSNPs¡£
SNPµÄÑо¿Êµ¼ÊÖ÷Òª°üÀ¨Á½¸ö·½Ãæ:
Ò»ÊÇSNPÊý¾Ý¿âµÄ¹¹½¨£¬Ö÷ҪĿµÄÊÇ·¢ÏÖÌØ¶¨ÖÖÀàÉúÎï»ùÒò×éµÄÈ«²¿»ò²¿·ÖSNP£»Ó¦¸Ã×¢Òâµ½£¬·¢ÏÖSNPÖ»ÊÇSNPÑо¿µÄµÚÒ»²½£¬¶øSNP¹¦ÄܵÄÑо¿²ÅÊÇSNPÑо¿µÄÄ¿µÄ¡£È¾É«ÌåDNAÌØ¶¨ÇøÓòµÄSNPµÄ¹¦ÄÜÑо¿ÊǺܶà·Ö×ÓºÍϸ°ûÉúÎïѧʵÑéÊÒ¿ÉÒÔ½øÐеŤ×÷¡£Ìض¨DNAÇøÓòµÄÌØ¶¨SNPÔÚÌØ¶¨ÈºÌåµÄÐòÁÐÑéÖ¤ºÍƵÂÊ·ÖÎöÒÔ¼°SNPÓëÌØ¶¨ÉúÀí/²¡Àí״̬¹ØÏµµÄÑо¿ÊÇSNPÑо¿µÄÖ÷Òª·½Ãæ¡£
¼ì²âµ¥ºËÜÕËá²îÒìµÄ·½·¨
(1) µ¥Á´¹¹Ïó¶à̬ÐÔ(Single St rand Conformation Polymorphism ,SSCP)
ÉúÎï´ó·Ö×ÓÔÚµ¥Á´ÐýתʱÓÉÈ¡´ú»ùÒòÐγɲ»Í¬Á¢Ìå½á¹¹¶ø²úÉú²»Í¬µÄ¹¹Ïó,ÕâÖÖ½á¹û¸Ä±ä²»Éæ¼°¹²¼Û¼üÆÆ»µ.DNA Ƭ¶ÎË«Á´Ðγɵ¥Á´ºó,ÔڷDZäÐÔÌõ¼þÏ»áÕÛµþ³É²»Í¬µÄ¿Õ¼ä¹¹Ïó,µ¥Á´ÕâÖÖ¹¹Ïó»áÒò¸ö±ðºËÜÕËáÖû»¶ø¸Ä±ä,³¤¶ÈÏàͬ»òÏà½üµÄµ¥Á´ÔÚµçӾʱÓÉÓÚ¹¹Ïó²»Í¬¶ø¾ß²»Í¬Ç¨ÒÆÂÊ,´Ó¶øÏÔʾ³ö¶à̬ÐÔ. ÔÚSSCP ·ÖÎöʱ,Ó¦ÏȽ«À©ÔöºóµÄDNA Ƭ¶Î±äÐÔΪµ¥Á´,È»ºóÔڷDZäÐÔ¾Û±ûÏ©õ£°·Äý½ºÖеçÓ¾¡£
(2) »ùÒòоƬ¼¼Êõ( Genetic Chips)
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(3) ëϸ¹ÜµçÓ¾¼¼Êõ
ëϸ¹ÜµçÓ¾ÊǽüÄê³öÏֵĸßЧ¿ìËÙ·ÖÀë·ÖÎö¼¼Êõ,·ºÖ¸ÔÚÉ¢ÈÈЧÂʸߵÄ20¡«100 um µÄϸ¹ÜÄÚÀûÓÃÓлòÎÞÄý½ºÉ¸Ñ¡»úÖÆºÍ¸ßÇ¿¶Èµç³¡µÄË«ÖØ×÷ÓÃÏÂ,DNA Ƭ¶ÎÒòÀë×Ó±íÃæ»ýºÍ·Ö×ÓÍâÐαäÒìµ¼ÖÂÇ¨ÒÆÊ±¼äµÄ²»Í¬¼ì²âSNP.
(4) Ö±½Ó²âÐò
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(5) PCR-RFLP
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Chapter 10 ÍâÔ´»ùÒòÔÚÕæºËϸ°ûÖеıí´ï
 
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ת»ùÒòÉúÎïµÄ¼ø¶¨ p250.


Ïà¹Ø»°Ìâ/·Ö×ÓÉúÎïѧ

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